柑橘内生细菌YS45的抗菌物质及该菌对油菜菌核病的生物防治作用

论文摘要

从柑橘健康植株的枝条木质部中分离得到对油菜核盘菌（Sclerotiniasclerotiorum）有拮抗作用的细菌菌株YS45。通过形态学和生理生化鉴定,结合16S rRNA基因序列分析的方法,确定YS45为一株枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）。YS45的发酵液（离心除去菌体）对油菜核盘菌有明显的抑菌作用。发酵液的抑菌活性具有较好的热稳定性,在pH 6.0～8.0之间最佳,在pH＜6.0的条件下较稳定,而在pH＞8.0的条件下不稳定。木瓜蛋白酶处理导致发酵液的抑菌活性降低。此外,YS45发酵液的抑菌活性随培养时间变化,形成一条与生长曲线类似的曲线。利用有机溶剂萃取的方法分离纯化发酵液中的抗菌物质,未能获得具有抑菌活性的物质,推测YS45菌株产生的抗菌物质属水溶性物质,具有较强的极性。利用酸沉淀的方法沉淀抗菌物质,试验表明pH 3.0的条件下沉淀物的保留活性为95%。酸沉淀物经甲醇抽提后,得到了抗菌物质的粗提物。粗提物经DEAE-Sepharose CL-6B和Sephadex G25分离纯化后,采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）对活性组分进行分离纯化,由此收集的组分用于质谱测定。质谱分析结果表明抗菌物质为一组fengycin同系物,包括fengycins A,fengycins B和最近发现的一种比较少见的fengycin类型。为了评估YS45菌株对油菜菌核病的生物防治效果,其发酵液被用于油菜离体叶片试验、盆栽苗试验和田间试验,结果表明;在油菜离体叶片试验和盆栽苗试验中,YS45发酵液的防效在70%以上;在田间试验中,其防效在50%以上（作为保护剂使用时,其防效在60%以上）。由此可见,YS45菌株确是一株具有重要开发价值的生防菌。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 菌种鉴定
• 1 材料
• 2 方法
• 2.1 形态学鉴定
• 2.2 生理生化鉴定
• 2.3 16S rRNA基因序列分析
• 3 结果与讨论
• 第二章 发酵液抑菌活性的稳定性
• 1 材料
• 2 方法
• 2.1 发酵液母液的制备
• 2.2 热稳定性试验
• 2.3 酸碱稳定性试验
• 2.4 酶解稳定性试验
• 2.5 发酵液抑菌活性与发酵时间的关系
• 3 结果与讨论
• 3.1 发酵液抑菌活性的热稳定性
• 3.2 发酵液抑菌活性的酸碱稳定性
• 3.3 发酵液抑菌活性的酶解稳定性
• 3.4 发酵液抑菌活性与发酵时间的关系
• 第三章 抗菌物质的分离纯化与鉴定
• 1 材料和仪器
• 2 方法
• 2.1 抗菌物质的有机溶剂萃取试验
• 2.2 酸沉淀与甲醇抽提试验
• 2.3 离子交换树脂分离纯化抗菌物质
• 2.4 分子筛层析柱脱盐
• 2.5 RP-HPLC分离纯化抗菌物质
• 2.6 抗菌物质的鉴定
• 3 结果
• 3.1 有机溶剂萃取试验的结果
• 3.2 酸沉淀与甲醇抽提试验的结果
• 3.3 离子交换层析柱的洗脱结果
• 3.4 分子筛层析柱的洗脱结果
• 3.5 RP-HPLC的分离纯化结果
• 3.6 抗菌物质的鉴定结果
• 4 讨论
• 第四章 YS45菌株的生物防治试验
• 1 材料
• 2 方法
• 2.1 油菜离体叶片试验
• 2.2 油菜盆栽苗试验
• 2.3 田间试验
• 3 结果
• 3.1 油菜离体叶片试验结果
• 3.2 油菜盆栽苗试验结果
• 3.3 田间试验结果
• 4 讨论
• 总结与展望
• 1、总结
• 2、创新和发现
• 3、展望
• 参考文献
• 致谢
• 综述
• 植物内生细菌的研究概况及其在生物防治领域的应用
• 附录
• 发表论文情况