长春花生物碱提取剩余物中熊果酸和齐墩果酸的分离纯化工艺研究

论文摘要

熊果酸和齐墩果酸为五环三萜类化合物,具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、保肝、降血脂和美白等作用。本文研究和探讨了从长春花生物碱提取剩余物中分离和纯化熊果酸和齐墩果酸的工艺。主要结论如下:1.确定了高效液相色谱测定熊果酸和齐墩果酸的方法:色谱柱:HiQsil C18（250mm×4.6mm,5μm）,流动相:乙腈:甲醇:0.5%醋酸铵=67∶12∶21（V∶V∶V）,流速:1mL/min,检测波长:210nm,柱温:室温。2.确定了熊果酸和齐墩果酸分离纯化工艺路线,具体工艺参数如下:（1）确定了熊果酸和齐墩果酸提取的工艺参数:提取方法为负压混悬空化提取,通气量为0.2m3/h,提取溶剂为90%乙醇,料液比为1∶10,提取时间为25min,提取次数为3次。（2）100g干燥的长春花生物碱提取剩余物经90%乙醇提取后得到浸膏19.0g,浸膏中熊果酸的纯度为11.00%,提取率为97.57%;齐墩果酸的纯度为3.01%,提取率为99.72%。（3）采用乙酸乙酯从90%乙醇浸膏中萃取熊果酸和齐墩果酸,萃取方法为超声加搅拌,萃取次数为3次。19.0g乙醇浸膏经乙酸乙酯萃取后得到粗品4.84g,粗品中熊果酸纯度为37.32%,回收率为86.36%;齐墩果酸的纯度为10.33%,回收率为87.26%。（4）采用柱层析法进一步纯化熊果酸和齐墩果酸,具体工艺参数如下:柱层析填料为300-400目硅胶,上样量为0.2g/10g硅胶,洗脱溶剂为正己烷∶乙酸乙酯=5∶4,流速为3ml/min,收集相应流出组分。4.84g乙酸乙酯萃取物柱层析后得到样品2.28g,柱层析产物中熊果酸的纯度为68.14%,回收率为86.05%:齐墩果酸的纯度为17.79%,回收率为81.21%。（5）将柱层析得到的熊果酸和齐墩果酸混合物2.28g用无水乙醇溶解,于4℃冰箱重结晶。结晶得到熊果酸和齐墩果酸晶体混合物1.505g,其中熊果酸纯度74.15%,回收率为76.39%;齐墩果酸纯度19.91%,回收率78.56%。（6）从90%乙醇提取→乙酸乙酯萃取→硅胶柱层析→无水乙醇重结晶过程,熊果酸的总回收率为55.39%,齐墩果酸的总回收率为55.53%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 长春花简介
• 1.1.1 长春花形态特征及分布
• 1.1.2 长春花中主要化学成分
• 1.1.3 长春花中其它化学成分
• 1.2 熊果酸的研究概况
• 1.2.1 熊果酸的结构及理化性质
• 1.2.2 熊果酸的药理作用
• 1.2.3 熊果酸的临床应用
• 1.3 齐墩果酸的研究概况
• 1.3.1 齐墩果酸的结构及理化性质
• 1.3.2 齐墩果酸的药理作用
• 1.3.3 齐墩果酸的临床应用
• 1.4 熊果酸和齐墩果酸的含量分析方法
• 1.4.1 薄层扫描法
• 1.4.2 高效液相色谱法（HPLC）
• 1.4.3 气相色谱法（GC）
• 1.4.4 液相色谱质谱联用（LC-MS）
• 1.5 熊果酸和齐墩果酸的提取分离方法
• 1.5.1 熊果酸和齐墩果酸的提取方法
• 1.5.2 熊果酸和齐墩果酸的分离纯化方法
• 1.6 选题依据与目的
• 2 熊果酸和齐墩果酸检测方法的建立
• 2.1 实验仪器与材料
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂与材料
• 2.2 熊果酸和齐墩果酸HPLC分析条件的确定
• 2.2.1 检测波长的确定
• 2.2.2 不同流动相体系对熊果酸和齐墩果酸色谱行为的影响
• 2.2.3 不同色谱柱对熊果酸和齐墩果酸色谱行为的影响
• 2.3 标准曲线的绘制
• 2.4 方法学考察
• 2.4.1 精密度实验
• 2.4.2 稳定性实验
• 2.4.3 重现性实验
• 2.4.4 加样回收率实验
• 2.5 样品含量测定
• 2.5.1 长春花原植物样品的制备
• 2.5.2 长春花生物碱提取剩余物样品的制备
• 2.5.3 结果与讨论
• 2.6 本章小结
• 3 负压空化混悬强化提取长春花生物碱提取剩余物中熊果酸和齐墩果酸的工艺研究
• 3.1 实验仪器与试剂
• 3.1.1 实验仪器
• 3.1.2 试剂与材料
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 提取方法的选择
• 3.2.2 提取溶剂的选择
• 3.2.3 空化混旋固液提取次数的选择
• 3.2.4 料液比对空化混旋提取效果的影响
• 3.2.5 空化混旋提取时间的选择
• 3.2.6 空化通气量的选择
• 3.2.7 乙醇浸膏中熊果酸和齐墩果酸的含量测定
• 3.4小结
• 4 熊果酸与齐墩果酸的纯化工艺研究
• 4.1 实验试剂与材料
• 4.2 溶剂萃取乙醇浸膏中的熊果酸和齐墩果酸
• 4.2.1 实验方法
• 4.2.2 结果与讨论
• 4.3 柱层析法分离纯化熊果酸和齐墩果酸
• 4.3.1 柱层析填料的选择
• 4.3.2 硅胶柱层析分离纯化熊果酸和齐墩果酸
• 4.4 重结晶
• 4.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢