论文摘要
研究背景：肝细胞肝癌（HCC）是预后较差的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率极高。目前，针对肝细胞肝癌的治疗仍以手术切除为主，但由于肝癌细胞对放化疗敏感性较差，且多种生长因子与HCC的发生、发展密切相关，严重影响了手术治疗的预后，单纯手术切除后3年复发率高于50%。因此，寻找可能的方法降低肝癌术后复发率成为亟待解决的问题。类胰岛素生长因子I（insulin-like growth factor I，IGF-1）是由肝细胞合成和分泌的一种重要生长刺激因子。研究结果表明，IGF-1通过类胰岛素样作用，促进组织摄取葡萄糖，增加细胞对氨基酸和糖原的吸收，刺激糖异生和糖酵解进而促进蛋白质和脂肪合成，在细胞增殖、分裂及凋亡过程中发挥重要影响，而近年来人们开发出一些针对其受体为靶点的靶向治疗药物，在体外实验取得了不错的效果，但IGF-1在肝癌复发、转移中的作用及机制目前尚未完全阐明。研究目的：阐述IGF-1对肝细胞癌生长、转移的作用及其作用机制，以及针对其受体的靶向治疗药物PPP的治疗作用及其作用机制，为临床肝癌治疗提供理论依据。研究内容：MTT方法检测IGF-1对肝癌细胞生长作用的影响；平板克隆形成实验检测IGF-1对肿瘤细胞增殖影响；划痕实验及Transwell方法检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力变化；流式细胞术检测肿瘤细胞的细胞周期变化；Western blot方法检测IGF-1受体（IGF-1R）、PI3K/Akt/GSK3β信号通路、细胞周期蛋白cyclin D、Rb、转移相关蛋白E-cadherin、Vimentin、β-catenin的表达水平变化。应用IGF-1受体靶向药物PPP作用肝癌细胞，观察其对肝癌细胞生长、侵袭作用的影响；流式细胞术检测细胞凋亡；Caspase3试剂盒检测Caspase3活性变化；Western blot检测凋亡关键蛋白Caspase3、线粒体通路关键蛋白Caspase9、Cytochrome c及调节蛋白Bax、Bcl-2以及其对转移相关蛋白的表达水平的影响。研究结果：1.IGF-1对肝细胞癌HepG2、Hep3B生长及转移作用的影响IGF-1促进肝癌细胞的生长、增殖及侵袭；IGF-1可以增加其受体磷酸化水平，进而增加pAkt、pGSK3β的表达，上调细胞周期的关键蛋白酶cyclin D和pRb的表达，同时，通过增加β-catenin蛋白的表达，使上皮细胞结构特征蛋白E-cadherin表达降低，而间质细胞结构蛋白Vimentin的表达增加，诱导肝癌细胞EMT的发生，当去除IGF-1刺激后，E-cadherin表达重新增加，而Vimentin表达未见明显变化。2.PPP对肝癌细胞HepG2、Hep3B生长侵袭作用的影响PPP可以抑制IGF-1诱导的肝癌细胞的生长、侵袭，促进肝癌细胞凋亡的发生，通过抑制pAkt的活性，增加Caspase3、Caspase9、Cytochrome c及Bax/Bcl-2比值；抑制IGF-1诱导的E-cadherin降低及Vimentin升高，降低β-catenin的表达。研究结论：IGF-1作用于肝癌细胞HepG2、Hep3B，通过激活IGF-1R/PI3K/Akt/GSK3β通路影响细胞周期关键蛋白cyclin D和Rb的表达，促进肝癌细胞的生长增殖，同时通过激活β-catenin的表达，诱导细胞骨架蛋白E-cadherin表达下降、Vimentin表达增加，进一步诱导肝癌细胞迁移、侵袭能力的增加，且当IGF-1浓度降低时，肝癌细胞EMT发生呈可逆性变化。IGF-1R靶向抑制剂PPP可以通过抑制IGF-1R/PI3K/Akt/GSK3β信号通路抑制IGF-1诱导的肿瘤细胞生长，通过激活Caspase依赖的线粒体途径诱导肝癌细胞凋亡的发生，同时通过降低β-catenin蛋白的表达抑制IGF-1诱导的EMT的发生。