抑制性寡脱氧核苷酸对小鼠实验性肝损伤保护作用及其机制研究

论文摘要

第一章刀豆球蛋白所致实验性肝损伤模型的构建目的:构建Con A诱导的小鼠实验性肝损伤模型。方法:Balb/C小鼠40只,分别尾静脉注射Con A,根据注射剂量的大小,小鼠被随机分为4组（每组10只）:A组为10mg/kg,B组为20mg/kg,C组为30mg/kg,另D组作为实验对照组尾静脉仅注射生理盐水。给药后8h时观察小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性、死亡率和C组心、肺、肾、脑、肝组织的病理改变。选择Con A剂量,并观察此剂量下不同时间点ALT活性、死亡率和肝组织的病理改变特点。结果:A组和D组未见小鼠死亡,B组死亡3只小鼠,C组全部死亡。A组和B组ALT活性显著高于D组。光镜下A组可见肝细胞变性,B和C组可见肝组织炎症细胞浸润和肝细胞变性、坏死,且以C组为甚。C组肺可见轻度充血、肾小管上皮细胞出现轻度空泡变性、而心、脑未见明显异常。20mg/kg Con A尾静脉注射,小鼠死亡率、ALT活性、肝组织炎症细胞浸润和肝细胞变性、坏死在一定时间范围内（24h）随着时间增加而加剧。结论:1.成功构建了Con A小鼠实验性肝损伤模型。2.Con A小鼠实验性肝损伤模型Con A最佳剂量为20mg/kg。第二章抑制性寡脱氧核苷酸对刀豆球蛋白所致肝损伤保护作用的观察第一节造模前12小时注射抑制性寡脱氧核苷酸对刀豆球蛋白所致肝损伤保护作用的观察目的:探讨造模前12小时（h）注射抑制性寡脱氧核苷酸（suppressive oligonucleotides,Sup ODN）对刀豆球蛋白A（ConA）所致小鼠实验性肝损伤的保护作用。方法:雌性Balb/C小鼠80只随机分为生理盐水（NS）组、环孢霉素（CsA）组、对照寡脱氧核苷酸（Control oligonucleotides,Con ODN）组、Sup ODN组,每小组又分8h和24h两个时间点,每个时间点观察10只小鼠。Con A（20 mg/kg）尾静脉注射小鼠造模。造模前12h时每组分别给予NS（0.3 mL/只）、Con ODN（20mg/kg）、CsA（130mg/kg）、Sup ODN（20mg/kg）腹腔给药。给药8h和24h时分别观察小鼠的死亡率;采血检测血清中TNF-α、IL-4、IFN-γ含量及丙氨酸氨基转氨酶（ALT）活性。RT-PCR检测肝组织的TNF-α、IFN-γmRNA的表达,同时观察肝组织的病理改变。结果:与NS、Con ODN组相比,Sup ODN组ALT活性和IFN-γ含量和IFN-γmRNA表达明显降低,IL-4含量明显升高（P＜0.01）。与NS和Con ODN组相比Sup ODN组肝细胞坏死程度和炎症细胞浸润显著减轻（P＜0.05）。第二节造模同时注射抑制性寡脱氧核苷酸对Con A所致肝损伤保护作用的观察目的:探讨造模同时注射Sup ODN对Con A所致小鼠实验性肝损伤的保护作用。方法:雌性Balb/C小鼠80只随机分为NS组、CsA组、Con ODN组、Sup ODN组,每小组又分8h和24h两个时间点,每个时间点观察10只小鼠。Con A（20 mg/kg）尾静脉注射小鼠造模。造模同时每组分别给予NS（0.3 mL/只）、Con ODN（20mg/kg）、CsA（130 mg/kg）、Sup ODN（20mg/kg）腹腔给药。给药8h和24h时分别观察小鼠的死亡率;采血检测血清TNF-α、IL-4、IFN-γ含量及ALT活性。RT-PCR检测肝组织的TNF-α、IFN-γmRNA的表达,同时观察肝组织的病理改变。结果:与NS、Con ODN组相比,Sup ODN组ALT活性和IFN-γ含量和IFN-γmRNA表达明显降低,而IL-4含量明显升高（P＜0.01）。与NS和Con ODN组相比Sup ODN组肝细胞坏死程度和炎症细胞浸润显著减轻（P＜0.05）。第三节造模后2小时注射抑制性寡脱氧核苷酸对Con A所致肝损伤保护作用的观察目的:探讨造模后2h注射Sup ODN对Con A所致小鼠实验性肝损伤的保护作用。方法:雌性Balb/C小鼠80只随机分为NS、,CsA组、Con ODN组、Sup ODN组,每小组又分8h和24h两个时间点,每个时间点观察10只小鼠。Con A（20 mg/kg）尾静脉注射小鼠造模。造模后2h时每组分别给予NS（0.3 mL/只）,Con ODN（20mg/kg）,CsA（130mg/kg）,Sup ODN（20mg/kg）。给药8h和24h时观察小鼠的死亡率;采血检测血清TNF-α、IL-4、IFR-γ含量及ALT活性。RT-PCR检测肝组织的TNF-α、IFN-γmRNA的表达,同时观察肝组织的病理改变。结果:Sup ODN与CsA组相比,死亡率明显降低（P＜0.01）。与NS、Con ODN组相比,Sup ODN组ALT活性和IFN-γ含量和IFN-γmRNA表达明显降低,而IL-4含量明显升高（P＜0.01）。与NS和Con ODN组相比Sup ODN组肝细胞坏死程度和炎症细胞浸润显著减轻（P＜0.05）。结论:Sup ODN对Con A诱导的小鼠实验性肝损伤有明显保护作用。第三章抑制性寡脱氧核苷酸作用机制的初步探目的:初步探讨抑制性寡脱氧核苷酸（suppressiveoligonucleotides,Sup ODN）对刀豆球蛋白A（Con A）所致肝损保护作用的机制。方法:实验动物分组、肝损伤模型构造及实验动物给药同第二章。Western blot测定脾组织中磷酸化的STAT4（phosphorylated STAT6,pSTAT4）、pSTAT6、T-bet蛋白表达,余指标检测同第二章。结果:血清TNF-α、IL-4、IFN-γ水平,RT-PCR检测肝组织的TNF-α、IFN-γmRNA的表达及肝组织的病理改变结果同第二章。SupODN抑制pSTAT4和T-bet表达,而对pSTAT6表达无影响。CsA对pSTAT6、pSTAT4和T-bet表达都无影响。结论:Sup ODN通过下调pSTAT4和T-bet表达,从而抑制IFN-γ产生,达到保护效应。Sup ODN对Con A诱导的肝损伤保护机制与CsA不同。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 中英文缩略词表
• 第一章 刀豆球蛋白所致实验性肝损伤模型的构建
• 1 引言
• 2 实验材料
• 3 方法
• 4 结果
• 5 讨论
• 6 结论
• 第二章 抑制性寡脱氧核苷酸对Con A所致肝损伤保护作用观察
• 前言
• 第一节 造模前12小时抑制性寡脱氧核苷酸对刀豆球蛋白A所致肝损伤保护作用的观察
• 1 引言
• 2 实验材料
• 3 方法
• 4 结果
• 第二节 造模同时抑制性寡脱氧核苷酸对Con A所致肝损伤保护作用的观察
• 1 引言
• 2 实验材料
• 3 方法
• 4 结果
• 第三节 造模后2小时抑制性寡脱氧核苷酸对刀豆球蛋白A所致肝损伤保护作用的观察
• 1 引言
• 2 实验材料
• 3 方法
• 4 结果
• 5 Sup ODN组间ALT活性的比较
• 6 Sup ODN组肝组织病理改变的比较
• 7 讨论
• 8 结论
• 第三章 抑制性寡脱氧核苷酸肝损保护作用机的初步探讨
• 1 引言
• 2 实验材料
• 3 方法
• 4 结果
• 5 讨论
• 6 结论
• 参考文献
• 抑制性寡脱氧核苷酸研究进展（综述一）
• 重型肝炎动物模型的研究进展（综述二）
• 致谢
• 攻读学位期间主要研究成果