核因子-κB在重症急性胰腺炎发病中的作用

论文摘要

目的:研究核转录因子-κB在牛磺胆酸钠诱导的大鼠重症急性胰腺炎中的动态变化规律,以及PPARγ激动剂吡格列酮对大鼠重症急性胰腺炎的干预作用。方法:共130只健康雄性Sprague-Dawley大鼠分为二大部分:第一部分:40只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,体重160-200g,随机分为假手术组（C组）、重症急性胰腺炎组（A组）和吡格列酮预处理组三个剂量组（P1组、P2组、P3组）,每组8只。采用盐酸氯胺酮腹腔注射麻醉下逆行胰胆管内加压注射5%牛磺胆酸钠（0.1ml/100g）建立SAP模型,P组大鼠在术前2h腹腔内注射吡格列酮（20mg/kg、50mg/kg、100mg/kg）,造模后大鼠自由摄食和饮水,比较各组大鼠的生存时间和60小时的生存率。第二部分:90只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,体重160-200g,随机分为假手术组（C组）、重症急性胰腺炎组（A组）和吡格列酮预处理组三个剂量组（P1组、P2组、P3组）,每组18只。采用盐酸氯胺酮腹腔注射麻醉下逆行胰胆管内加压注射5%牛磺胆酸钠（0.1ml/100g）建立SAP模型。P组大鼠在术前2h腹腔内注射吡格列酮（20mg/kg、50mg/kg、100mg/kg）。分别于术后3、6、12h 3个时间点采用腹主动脉放血法将大鼠分批处死（每次每组6只）,取腹水进行淀粉酶检测,并取腹主动脉血采用ELISA法测血清炎症细胞因子IL-6的水平;取胰腺组织,分为两部分:第一部分立即放于10%中性甲醛溶液（100ml/L）固定,用于进行常规HE染色;第二部分立即放入液氮罐内冻存用于Western blot法检测。采用Western blot法检测胰腺组织NF-κB蛋白的表达,同时进行胰腺组织病理学评分的测定,并观察吡格列酮预处理后上述各指标的变化。结果:1.五组大鼠的生存时间和60小时的生存率（第一部分）:P组大鼠生存时间较A组明显延长,但低于C组（P<0.01）,P2组的生存时间与A组的差异有统计学意义（P<0.05）,P2组和P3的生存时间与A组的差异无统计学意义。A组大鼠造模后60h的生存率是12.5%,P1、P2、P3组的生存率分别为25%、37.5%、37.5%,A组与P2组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。说明P2疗效优于P1和P3组（见表3.1、表3.2）。2.腹水淀粉酶变化:C组无腹水形成,P组腹水淀粉酶水平在各时间点与A组相比,有所降低,但差异无统计学意义（P>0.05）（见表3.3）。3.胰腺组织病理学评分:与C组相比,A组、P组各时间点均明显升高,差异有统计学意义（P<0.01）;P组与A组相比,在3h差异无统计学意义（P>0.05）,在6h、12h差异有统计学意义（P<0.05）（见表3.4）。4.血清IL-6水平变化:与C组相比,A组、P组各时间点均明显升高,差异有统计学意义（P<0.01）,P组与A组相比,在3h差异无统计学意义（P>0.05）,在6h、12h相差异有统计学意义（P<0.05）（见表3.5）。5.胰腺组织NF-κB p65蛋白的表达变化:胰腺组织NF-κBp65的活化程度:与C组相比,A组、P组各时间点活化程度均明显升高,差异有显著性（P<0.01）; A组与P2组相比,在3h差异无统计学意义,在6h、12h差异有统计学意义( （P<0.05）（见附图17,表3.6）。结论:1.吡格列酮预处理组可延长重症急性胰腺炎大鼠的生存时间,同时降低重症急性胰腺炎大鼠60小时的死亡率,以50mg/kg剂量组（P2组）疗效最为显著。2.IL-6是反应急性胰腺炎严重程度的可靠指标,研究显示IL-6的水平高低与急性胰腺炎的严重程度相平行,当有效的抑制NF-κB活性后,IL-6显著下降。3.急性重症胰腺炎的炎症介质的产生始发于NF-κB的过度活化,应用NF-κB激活的抑制剂阻断NF-κB激活,在转录水平下调炎症介质表达,从而改善病情。因此,选择一个适当时机抑制NF-κB的活化必定可以减轻SAP的进展,降低胰腺炎对机体所造成损害,这将为今后SAP的治疗提供了一条新的途径。4.吡格列酮通过活化PPARγ途径,抑制NF-κB的活性,减轻大鼠SAP炎症程度,因此,其有望成为一种新的临床治疗SAP的方法。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 主要实验试剂、药品
• 2.3 主要实验仪器、设备
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 实验分组：130 只大鼠分为二部分:
• 2.4.2 模型的建立
• 2.4.3 取材
• 2.5 观察指标
• 2.6 测定和检测
• 2.6.1 五组大鼠的生存时间和60 小时生存率（第一部分）
• 2.6.2 腹水淀粉酶的测定
• 2.6.3 胰腺组织病理学评分
• 2.6.4 血清IL-6 测定
• 2.6.5 胰腺组织NF-κB p65 蛋白表达的分析
• 2.7 统计处理
• 第3章 结果
• 3.1 五组大鼠的生存时间和 60h 生存率（第一部分）
• 3.2 腹水淀粉酶变化
• 3.3 胰腺组织病理学评分
• 3.4 血清IL-6 水平变化
• 3.5 胰腺组织 NF-κB p65 蛋白的表达
• 第4章 讨论
• 4.1 重症急性胰腺炎大鼠模型的建立
• 4.2 吡格列酮对 NF-κB 活性的抑制作用
• 4.3 白介素-6（IL-6）与重症急性胰腺炎
• 4.4 NF-κB 在重症急性胰腺炎发生过程中的可能机制
• 第5章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 攻读硕士期间的研究成果