重组腺相关病毒载体介导的人载脂蛋白A-I及载脂蛋白A-IMilano在肌源细胞中的表达

论文摘要

目的 ApoA-IMilano是apoA-I的一种突变体,它抗氧化能力强,能提高胆固醇逆转运效率,具有比较强的抗动脉粥样硬化和心血管保护作用。本实验以重组2型腺相关病毒（rAAV）为载体介导人apoA-I及apoA-IMilano在小鼠肌源性细胞C2C12中的表达,探索一种崭新的、安全经济的预防和治疗动脉粥样硬化性疾病的途径。 方法 以正常人肝组织中抽提的RNA为模板,用RT-PCR方法获得人apoA-I的cDNA,点突变方法制备apoA-IMilano的cDNA。分别将apoA-I、apoA-IMilano的cDNA插入rAAV载体质粒,并与辅助质粒共转染包装细胞293T获得重组腺相关病毒载体rAAVA及rAAVAM,粗提后以冰乙醇法进行浓缩。斑点杂交检测rAAV载体滴度,SDS-PAGE检测其纯度。分别用含apoA-I或apoA-IMilano cDNA的rAAVA和rAAVAM对小鼠肌源性细胞C2C12进行感染,ELISA法检测蛋白表达情况。 结果 测序结果表明,RT-PCR、PCR产物序列正确,点突变成功。斑点杂交鉴定rAAVA及rAAVAM的滴度均在2×1014个/L左右。SDS-PAGE结果表明rAAV纯度良好。ELISA结果表明,apoA-I及apoA-IMilano分别获得0.39±0.04ug/mL和0.31±0.03ug/mL的表达水平。 结论 成功制备表达apoA-I或apoA-IM的重组腺相关病毒载体,

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 1.实验材料
• 2.实验方法
• 第三章 结果
• 1.RT-PCR结果
• 2.PCR加酶切位点和HIS标签
• 3.定点突变结果
• 4.AAV载体质粒构建
• 5.斑点杂交鉴定rAAV滴度
• 6.SDS-PAGE鉴定rAAV纯度
• 7.ELISA检测蛋白表达情况
• 第四章 讨论
• 第五章 小结
• 参考文献
• 致谢
• 综述