土壤烟草青枯病菌的分离鉴定及硼酸钠对该菌的影响

论文摘要

本文以重要的经济作物的病原细菌——烟草青枯病菌为研究对象,研究并建立了一套成本低廉、简单快速的土壤青枯病菌分离检测方法。本实验重点在于研究硼酸钠对烟草青枯病菌的影响,分析硼酸钠对烟草青枯病菌影响的机理,为开发新型土壤改良剂提供理论依据。全文的主要结论如下：1、土壤中白肋烟青枯病菌的分离鉴定与生化型分析为了建立一套成本低廉、简单快速的土壤青枯病菌分离检测方法,本研究将半选择性培养基（PCCG）和PCR技术相结合,从白肋烟栽培土壤中分离鉴定出12个菌株,并分析了这12个菌株的ITS序列。结果表明：分离的12个菌株ITS序列与与青枯病菌同源性最高,表明该方法适合于土壤中青枯病菌的分离鉴定。此外,根据Hayward的青枯病菌生化型鉴定方法试验结果表明12个菌株均为生化型Ⅲ。2、硼酸钠对烟草青枯病菌在马铃薯蔗糖培养液中生长的菌影响在其他条件最优的情况下,硼酸钠对烟草病菌的生长有着显著的抑制作用。硼酸钠的抑制作用与硼酸钠的浓度呈正相关。随着硼酸钠的浓度的不断升高,烟草青枯病菌的生长量不断降低,其生长抑制率不断上升,最高可达到94.7%。3、硼酸钠对烟草青枯病菌在无菌水中生存的影响在没有营养物质存在的条件下,硼酸钠对烟草青枯病菌的生存有显著影响。随着时间的推移,烟草青枯病菌数量逐渐减少。当硼酸钠浓度达到80mmol/L时,烟草青枯病菌随着时间的推移不断减少,17天时青枯病菌全部致死。4、硼酸钠对土壤中烟草青枯病菌生长的影响当硼酸钠到一定浓度时可以抑制土壤中烟草青枯病菌的生长。土壤中烟草青枯病菌的菌浓度与土壤中硼酸钠的浓度呈负相关。随着时间的推移,烟草青枯病菌逐渐停止生长,其数量也逐渐减少。土壤中硼酸钠浓度越高,烟草青枯病菌菌浓度越低,致死速度越快。烟草青枯病菌在土壤中的存活与生长均被硼酸钠显著抑制。5、硼酸钠对烟草青枯病菌胞外多糖的影响硼酸钠对于单个烟草青枯病菌产胞外多糖的量的影响不大,硼酸钠通过影响烟草青枯病菌的生长量来影响总胞外多糖量。6、硼酸钠对烟草青枯病菌胞内蛋白和胞外蛋白的影响经电泳、考马斯亮蓝染色、脱色后,凝胶成像系统下观察SDS-PAGE胶。硼对青枯菌胞内及胞外蛋白表达均有显著影响,从加入0.5mmol/L硼酸钠的培养基制备出来的青枯菌样品中选择了2个蛋白点,分别是胞内蛋白1号和胞外蛋白2号。Mascot Search的结果显示青枯菌在0.5mmol/L硼酸钠的作用下,其胞内蛋白1号差异条带与Ralstonia solanacearumGM11000的一种信号肽一致性最高；其胞外蛋白2号差异条带与Ralstonia solanacearumGM11000的TEK信号转导相关。说明硼酸钠对烟草青枯病菌的影响可能与青枯病菌的信号转导有关,具体分析有待进一步研究。7、硼酸钠对烟草青枯病纤维素酶的影响硼酸钠显著影响烟草青枯病菌产纤维素酶活性。随着硼酸钠浓度的升高,纤维素酶活性快速降低。当硼酸钠浓度达到2.0mmol/L时,未检测到纤维素酶活性。8、硼酸钠对烟草青枯病菌果胶酶的影响硼酸钠对烟草青枯病菌产果胶酶活性有显著抑制作用。随着硼酸钠浓度的升高,果胶酶活性逐渐减低。当硼酸钠浓度达到2.5mmol/L后,未检测到果胶酶活性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 文献综述
• 1.1 烟草青枯病菌的研究进展
• 1.1.1 青枯病菌生物学特性
• 1.1.2 烟草青枯病菌的防治
• 1.1.3 烟草青枯病菌的监测
• 1.1.4 烟草青枯病菌的致病机理
• 1.2 硼在植物抗病性中作用的研究进展
• 1.2.1 硼与植物的抗病性
• 1.2.2 硼对病原菌的抑制作用
• 1.3 土壤中的硼元素
• 第2章 绪论
• 2.1 研究目的与意义
• 2.2 研究内容及技术路线
• 2.2.1 研究内容
• 2.2.2 研究技术路线
• 2.3 本文的创新点
• 第3章 实验材料与方法
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 供试菌株和土壤
• 3.1.2 主要仪器设备
• 3.1.3 基本培养基
• 3.1.4 主要溶液及配制
• 3.1.5 主要试剂和试剂盒
• 3.2 土壤中白肋烟青枯病菌的分离鉴定与生化型分析
• 3.2.1 烟草青枯病菌的PCR初步筛选
• 3.2.2 烟草青枯病菌株的纯化保存与ITS鉴定
• 3.2.3 烟草青枯病菌生化型鉴定
• 3.3 硼酸钠对烟草青枯病菌生长与生存的影响
• 3.3.1 硼酸钠对烟草青枯病菌在马铃薯蔗糖培养液中生长的菌影响
• 3.3.2 硼酸钠对烟草青枯病菌在无菌水中生存的影响
• 3.3.3 硼酸钠对土壤中烟草青枯病菌生长的影响
• 3.4 硼酸钠对烟草青枯病菌代谢产物的影响
• 3.4.1 硼酸钠对烟草青枯病菌胞外多糖的影响
• 3.4.2 硼酸钠对烟草青枯病菌胞内蛋白的影响
• 3.4.3 硼酸钠对烟草青枯病菌胞外蛋白的影响
• 3.4.4 硼酸钠对烟草青枯病纤维素酶的影响
• 3.4.5 硼酸钠对烟草青枯病菌果胶酶的影响
• 第4章 结果和分析
• 4.1 土壤中白肋烟青枯病菌的分离鉴定与生化型分析
• 4.1.1 烟草青枯病菌的PCR初步鉴定结果
• 4.1.2 菌中的分离纯化与保存
• 4.1.3 烟草青枯病菌株的ITS鉴定结果
• 4.1.4 烟草青枯病菌生化型鉴定结果
• 4.2 硼酸钠对烟草青枯病菌生长与生存的影响
• 4.2.1 硼酸钠对烟草青枯病菌在马铃薯蔗糖培养液中生长的菌影响
• 4.2.2 硼酸钠对烟草青枯病菌在无菌水中生存的影响
• 4.2.3 硼酸钠对土壤中烟草青枯病菌的影响
• 4.3 硼酸钠对烟草青枯病菌代谢产物的影响
• 4.3.1 硼酸钠对烟草青枯病菌胞外多糖的影响
• 4.3.2 硼酸钠对烟草青枯病菌胞内蛋白和胞外蛋白的影响
• 4.3.4 硼酸钠对烟草青枯病纤维素酶的影响
• 4.3.5 硼酸钠对烟草青枯病菌果胶酶的影响
• 第5章 讨论
• 5.1 土壤中白肋烟青枯病菌分离鉴定方法的选择
• 5.1.1 菌种分离纯化的优化
• 5.1.2 菌种筛选鉴定的优化
• 5.2 硼酸钠对烟草青枯病菌的影响
• 5.2.1 烟草青枯病菌的生长与生存
• 5.2.2 硼酸钠与烟草青枯病菌致病性的关系
• 第6章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 在校期间所发表的论文