论文摘要
目前随着社会经济发展,人与动物直接或间接接触机会越来越多,关于野生动物感染隐孢子虫的报道越来越受到人们的关注。但国内外关于牦牛和非人灵长类动物猴的报道有限,基于与人类的特殊关系,本研究对我国某些种类野生动物隐孢子虫感染情况进行详细调查。获得60个牦牛隐孢子虫分离株和24个食蟹猴隐孢子虫分离株,对分离株进行基于18S rRNA基因和GP60基因的序列分析,鉴定其感染种类和基因亚型,从而可以评价其公共卫生意义。1.为了解牦牛寄生虫感染情况,用改良抗酸染色法和饱和蔗糖溶液漂浮法检查来自青海的犊牦牛粪便样品456份。结果:饱和蔗糖溶液漂浮法,球虫平均感染率为62.7%(286/456),1-5月龄的感染率分别为53.6%(15/28)、46.2%(24/52)、62.0%(98/158)、66.0%(68/103)、70.4%(81/115);改良抗酸染色法,隐孢子虫平均感染率为13.2%(60/456),1-5月龄的感染分别为27.8%(13/28)、9.1%(12/52)、10.1%(16/158)、13.6%(14/103)、4.3%(5/115)。不同月龄牦牛的隐孢子虫感染率有所不同,球虫的感染率相当高,应引起重视。为进一步确切掌握牦牛隐孢子虫感染情况和牦牛隐孢子虫遗传特征,作者对已分离到的牦牛隐孢子虫阳性分离株进行卵囊纯化,DNA提取,应用巢式PCR-RFLP法和序列分析法,对牦牛隐孢子虫分离株扩增分析。结果2个分离株均与Cryptosporidium ryane(FJ463193)相近,同源性为100%,这也是国内外首次在牦牛体内发现Cryptosporidium ryane。2.作者对采集于南宁的245份食蟹猴粪样进行实验调查,结果表明:应用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法,隐孢子虫感染率为9.8%(24/245)。利用巢式PCR扩增到4个食蟹猴隐孢子虫分离株18S rRNA基因部分片段,和13个GP60基因部分片段。对4个食蟹猴隐孢子虫分离株进行18SrRNA基因位点、GP60基因位点的扩增、克隆、测序,序列长度均为830bp左右。利用Clustal X1.81、phylip 3.67和DNAstar4.0等生物学软件对序列进行比对、构建进化树以及同源性分析。结果显示基于18SrRNA基因的4个分离株和C. muris等肠道寄生的隐孢子虫在一个群上。同源性分析显示,4个分离株与GenBank上下载的C. muris的同源性均为100%;基于GP60基因的13个分离株和C. hominiss等肠道寄生的隐孢子虫在一个群上。同源性分析显示,13个分离株与GenBank上下载的C. hominiss的同源性为100%和2个99.9%;
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