不同光照条件下褪黑素对鸭免疫机能的影响

论文摘要

本试验分3组（短光照组6h、对照组12h和长光照组18h ）饲养幼鸭45只,通过控制光照时间来改变鸭体内褪黑素的水平,利用经典血细胞计数法、流式细胞术、放射免疫测定法、酶联免疫分析法、分子克隆和原位杂交技术对外周血细胞、细胞因子、免疫球蛋白、淋巴细胞及其亚群的变化和褪黑素3型受体亚型在鸭免疫器官中mRNA的表达及分布规律进行了研究,从而阐明不同光照条件下内源性褪黑素对鸭免疫功能的影响。结果如下:随着光照时间的缩短,内源性褪黑素水平的升高,鸭外周血中的白细胞数（P< 0.01）、红细胞数（P< 0.01）、血红蛋白含量（P< 0.01）、IL-2 （P< 0.05）、IL-6 （ P > 0.05）、TNF-α（P>0.05）、γ-IFN （ P<0.01）、IgG（P<0.01）、CD3+CD4+（P<0.01）、CD3+CD8+ （P<0.01）T细胞和Bu-1a+ B细胞（P<0.01）的数量均增加;随着光照时间的延长,内源性褪黑素水平的降低,鸭外周血中的白细胞数（P<0.01）、红细胞数（P< 0.01）、血红蛋白含量（P<0.05）、IL -2 （P < 0.05）、IL -6 （P > 0.05）、TNF -α（P > 0.05）、γ-IFN（P<0.01）、IgG （P<0.05）、CD3+CD4+ （ P<0.01）、CD3+CD8+ （P< 0.01）和Bu-1a+ B细胞（P<0.01）的数量均减少。根据GenBank登载的鸡褪黑素3型受体亚型的mRNA序列设计3对引物,采用RT-PCR技术首次从鸭脑组织中克隆出褪黑素3型受体亚型的部分cDNA片段,长度分别为603bp、468bp和504bp ,应用DNAstar分析软件进行序列分析,结果显示:鸭3型褪黑素受体亚型核苷酸序列与鸡的对应序列同源性较高,分别为:93.5 %、95.9%和95.0%。采用地高辛分别标记褪黑素3型受体亚型制成cDNA探针,采用原位杂交法检测Mel1a、Mel1b、Mel1c受体基因mRNA在鸭脾脏、胸腺和腔上囊中的表达。结果显示:以上3种褪黑素受体亚型mRNA在鸭的脾脏、胸腺和腔上囊中均有表达,阳性信号密集分布于上述器官中存在有T、B淋巴细胞的胞核和胞浆内;分别对脾脏、胸腺和腔上囊中褪黑素受体的分布情况进行比较发现,同型褪黑素受体之间按时间组比:阳性信号强弱为18h>12h>6h ;同一时间组的不同褪黑素受体亚型之间进行比较:阳性信号强弱为:Mel1a>Mel1c >Mel1b。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 褪黑素的生物合成与代谢
• 1.1.1 褪黑素的生物合成
• 1.1.2 褪黑素的代谢
• 1.2 褪黑素受体及其分布
• 1.2.1 褪黑素受体
• 1.2.2 褪黑素受体的分布
• 1.3 褪黑素与免疫系统
• 1.3.1 褪黑素与细胞免疫
• 1.3.2 褪黑素与体液免疫
• 1.3.3 褪黑素对细胞因子的调节作用
• 1.3.4 褪黑素与免疫器官
• 1.3.5 褪黑素调节免疫系统的作用机制
• 1.4 流式细胞分析技术概述和基本原理
• 1.4.1 流式细胞分析技术概述
• 1.4.2 流式细胞分析技术基本原理
• 1.5 原位杂交技术概述和基本原理
• 1.6 本研究的目的与意义
• 2 试验研究
• 2.1 不同光照条件下褪黑素对鸭外周血细胞的影响
• 2.1.1 材料与方法
• 2.1.2 结果与讨论
• 2.1.2.1 不同光照条件对鸭外周血中白细胞总数的影响
• 2.1.2.2 不同光照条件对鸡外周血中红细胞数和血红蛋白含量的影响
• 2.1.2.3 讨论
• 2.2 不同光照条件下褪黑素对鸭外周血细胞因子和IgG 的影响
• 2.2.1 材料与方法
• 2.2.2 结果与讨论
• 2.2.2.1 不同光照条件下鸭血中内源性褪黑素的水平
• 2.2.2.2 不同光照条件下鸭血中IL-2、IL-6、TNF-α、γ-IFN和 IgG 的变化规律
• 2.2.2.3 讨论
• 2.3 不同光照条件下褪黑素对鸭外周血T 、B 淋巴细胞及其亚群的影响
• 2.3.1 材料与方法
• 2.3.2 结果与讨论
• 2.3.2.1 不同光照对鸭淋巴细胞及其亚群的影响
• 2.3.2.2 讨论
• 2.4 鸭褪黑素受体 （dMel1a 、dMel1b、 dMel1c） 基因片段的克隆与序列分析
• 2.4.1 材料与方法
• 2.4.2 结果与讨论
• 2.4.2.1 总 RNA 的提取
• 2.4.2.2 RT-PCR扩增结果
• 2.4.2.3 序列分析
• 2.4.2.4 核苷酸同源性比较及进化树分析
• 2.4.2.5 推导的氨基酸序列分析
• 2.4.2.6 讨论
• 2.5 鸭 3 型褪黑素受体 （dMel1a 、dMel1b、 dMel1c） 的探针制备及原位杂交检测
• 2.5.1 材料与方法
• 2.5.2 结果与讨论
• 2.5.2.1 dMel1a、dMel1b和 dMel1c cDNA 探针的检测
• 2.5.2.2 褪黑素受体亚型（dMel1a、dMel1b和dMel1c）在鸭脾脏中的表达
• 2.5.2.3 褪黑素受体亚型（dMel1a、dMel1b和dMel1c）在鸭胸腺中的表达
• 2.5.2.4 褪黑素受体亚型（dMel1a、dMel1b和dMel1c）在鸭腔上囊中的表达
• 2.5.2.5 讨论
• 3 结论
• 3.1 试验总体结论
• 3.2 研究创新
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介