氨氯地平下调oxLDL诱导的HUVEC-12细胞MCP-1的表达并抑制其趋化THP-1细胞

论文摘要

研究背景: MAPK是丝/苏氨酸蛋白激酶,可被多种细胞外刺激激活并介导细胞反应。P38MAPK是MAPK家族中的重要成员,能被致炎因子如肿瘤坏死因子和氧化低密度脂蛋白等激活,触发级联反应而引起炎症因子分泌,在动脉粥样硬化的发展中具有重要作用。单核细胞趋化蛋白-1是强有力的趋化因子,在动脉粥样硬化早期募集单核细胞/巨噬细胞到血管壁。研究表明动脉粥样硬化斑块中MCP-1表达明显升高。动脉粥样硬化是慢性炎症反应过程,从脂质条纹到斑块破裂与血栓形成过程中,炎症反应始终贯穿其中。氨氯地平是第三代二氢吡啶类钙通道阻滞剂,广泛用于治疗高血压。已证实其能抑制人与动物动脉粥样硬化的发生发展,其机制可能与如改善内皮功能、抑制平滑肌细胞增殖和抗氧化应激等作用相关。本实验拟观察氨氯地平对oxLDL诱发的HUVEC-12内皮细胞MCP-1表达及对THP-1单核细胞趋化作用的影响。目的:从炎症反应角度,观察氨氯地平对oxLDL诱发的HUVEC-12内皮细胞MCP-1表达及对THP-1单核细胞趋化作用的影响,并对其机制进行探讨,为氨氯地平抗As提供实验依据。方法:1.不同浓度（0、25、50、100 mg/L）oxLDL与HUVEC-12内皮细胞孵育24h,50 mg/L oxLDL与HUVEC-12内皮细胞孵育不同时间（0、3、6、12、24h）后,Western blot与RT-PCR分别检测细胞p38MAPK磷酸化水平及MCP-1 mRNA的表达,筛选出最佳处理浓度与时间。2.不同浓度氨氯地平（0、0.1、1.0、10.0μM）预孵育HUVEC-12内皮细胞1h后,与50mg/LoxLDL共同孵育24h,Western blot与RT-PCR分别检测细胞p38MAPK磷酸化水平及MCP-1 mRNA的表达,ELISA检测培养上清液中MCP-1蛋白质的表达。3. 10.0μM氨氯地平预孵育HUVEC-12内皮细胞1h和20μM p38MAPK抑制剂SB203580预孵育HUVEC-12内皮细胞30分钟后,与50 mg/L oxLDL共同孵育24h,Western blot与RT-PCR分别检测细胞p38MAPK磷酸化水平及MCP-1 mRNA的表达,ELISA检测培养上清液中MCP-1蛋白质的表达。4.将HUVEC-12内皮细胞种于Transwell下室,50mg/L oxLDL处理细胞24小时,然后在上室种THP-1单核细胞,4小时后计数下室的THP-1单核细胞数。将HUVEC-12内皮细胞种于Transwell下室,用10.0μM氨氯地平预孵育内皮细胞1小时,20μM SB203580预孵育内皮细胞30分钟,再将THP-1细胞种到上室,4小时后计数下室的THP-1单核细胞数,观察THP-1单核细胞趋化的情况。结果:1. OxLDL在0-100mg/L的浓度范围内,随oxLDL浓度增加,p-p38MAPK和MCP-1mRNA的表达随之上调,浓度为50mg/L时,p38MAPK磷酸化水平及MCP-1mRNA的表达达峰值,浓度为100mg/L时,表达下降。50mg/L的oxLDL与HUVEC-12内皮细胞孵育0-24h内,呈时间依赖性上调MCP-1mRNA的表达,p38MAPK磷酸化水平在3h达峰值,此后维持在这一水平。2.不同浓度氨氯地平预孵育HUVEC-12内皮细胞1h后,与oxLDL共同孵育24h,p38MAPK磷酸化水平及MCP-1的表达下降,并呈量效关系。3. 10.0μM氨氯地平和20μM p38MAPK抑制剂SB203580预孵育HUVEC-12内皮细胞后,与oxLDL共同孵育24h,p38MAPK磷酸化水平及MCP-1的表达明显降低,氨氯地平与SB203580单独处理细胞时,两者的表达没有明显改变。4.将HUVEC-12内皮细种到transwell下室并用oxLDL处理细胞后,对THP-1单核细胞的趋化作用明显增强。当用10.0μM氨氯地平与20μMSB203580预孵育内皮细胞后,对THP-1单核细胞的趋化作用却明显减弱。结论:1. OxLDL可以活化HUVEC-12内皮细胞p38MAPK通路并上调MCP-1的表达;2.氨氯地平可以下调oxLDL诱导的HUVEC-12内皮细胞MCP-1的表达,这一作用可能与其抑制p38MAPK活化相关;3.氨氯地平可以抑制oxLDL诱导的HUVEC-12内皮细胞对THP-1单核细胞的趋化。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 英文缩略语索引
• 综述
• 硕士期间发表的论文
• 致谢