论文摘要
目的 构建人转化生长因子β3的真核表达载体pcDNA3.1（一）/TGFβ3,以及该重组质粒转染NIH3T3成纤维细胞的稳定表达系统,检测TGFβ3基因在成纤维细胞中的表达和该系统细胞的生长增殖性状。方法 利用重组DNA技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定真核表达载体pcDNA3.1（一）/TGFβ3。通过脂质体介导的转染技术和G418细胞筛选法,将所构建的重组质粒导入NIH3T3成纤维细胞,构建TGFβ3转基因NIH3T3成纤维细胞系,应用RT-PCR检测hTGFβ3在真核细胞中的表达。经四唑蓝比色实 验法（MTT）分别对hTGFβ3重组质粒稳定表达细胞组、空载体组和NIH3T3对照组进行检测。结果 经琼脂糖凝胶电泳及测序证实,酶切片段与GenBank中登记的TFGFβ3全长序列相同,pcDNA3.1（一）/TGFβ3酶切片段的长度与理论大小相符。在10株转染和经G418反复筛选的NIH3T3成纤维细胞系中,有7株hTGF β3mRNA的表达明显增强,其余3株细胞相对较弱或者没有表达。TGF β3转基因NIH3T3成纤维细胞系的生长速度下降,以4-5天尤为显著。结论 pcDNA3.1（一）/TGF β3真核表达载体以及该重组质粒转染NIH3T3成纤维细胞的稳定表达系统构建成功,转基因hTGFβ3在体外培养条件下可抑制成纤维细胞的增殖,由此推论与展望, 转基因TGF β3可能对瘢痕增生有较好的抑制作用。
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