川芎嗪联合贝纳普利防治GK大鼠并发肾病的实验研究及机理探讨

论文摘要

目的:初步观察川芎嗪联合贝那普利对GK大鼠并发肾病的大鼠肾组织TNF-α、ICAM-1、OPN等表达水平的防治作用并探讨其调控作用的可能机制;探讨DN病变程度与炎症表达的关系,并进一步探讨糖尿病肾病的发病机制,寻找早期诊断及评价DN病变的新指标。方法:将40只雄性GK大鼠随机分为模型组、贝那普利组、川芎嗪组、川芎嗪+贝那普利组;每组10只。模型组,按5ml·kg-1·d-1灌服生理盐水;贝那普利组,按1.6mg·kg-1·d-1灌服贝那普利悬液;川芎嗪组,按150mg·kg-1·d-1灌胃（其浓度为20mg/ml）;川芎嗪+贝那普利组,川芎嗪按150mg·kg-1·d-1灌服,加灌贝那普利悬液(按1.6mg·kg-1·d-1);共16周。实验第8周、第12周和第16周将大鼠放入代谢笼中,收集24h尿液,测定24h尿蛋白定量;治疗16周后,将大鼠用3%戊巴比妥钠腹腔麻醉后剖腹,摘取肾脏。反转录聚合酶链反应法（RT-PCR）测肾组织TNF-α、OPN含量,免疫组化检测肾脏ICAM-1的表达,并测定各组大鼠血IL-6和尿RBP水平。结果:与其它组比较,模型组大鼠血糖明显增高（P＜0.05）,24h尿蛋白定量明显升高（P＜0.05）,肾组织TNF-α、ICAM-1、OPN表达明显增加（P＜0.05,或p＜0.01）;血IL-6和尿RBP、24h尿蛋白等指标增加（P＜0.05,或p＜0.01）。川芎嗪联合贝那普利能降低血糖、TG和TC;下调肾组织TNF-α、ICAM-1、OPN表达水平,降低血清肌酐、尿素氮水平,提高内生肌酐清除率,减少尿白蛋白的排泄,降低IL-6水平;从而改善DN大鼠的肾功能。结论:川芎嗪联合贝那普利能降低糖尿病肾病大鼠血糖水平,改善DN大鼠肾功能,改善肾组织炎症病变和抗凝作用。下调肾组织TNF-α、ICAM-1、OPN表达和降低IL-6水平可能为其作用机制之一。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 前言
• 实验研究
• 1.材料和方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要仪器设备
• 1.3 主要材料与试剂
• 2.实验方法
• 2.1 动物的选择与喂养
• 2.2 糖尿病动物模型的建立
• 2.3 分组与治疗
• 3.标本的采集和处理
• 3.1 大鼠24小时尿标本
• 3.2 大鼠血液和肾脏标本
• 4.肾脏病理染色
• 4.1 组织脱水、包埋及切片
• 4.2 苏木-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色
• 4.3 过碘酸-雪夫（periodicacid-schiff,PAS）染色
• 4.4 切片图形系统分析
• 5.指标观测
• 5.1 一般指标
• 5.2 血糖的测量
• 5.3 生化指标检测
• 5.4 尿视黄醇结合蛋白（Retinol-binding protein,RBP）的测定（双抗夹心ELISA法测定）
• 5.5 血清TNF-α的测定[放射性免疫法（平衡法）测定]
• 5.6 肾组织TNF-α mRNA的表达（采用RT-PCR方法测定）
• 5.7 血清IL-6的测定（双抗体夹心ELISA法测定）
• 5.8 肾组织OPNmRNA的表达（采用RT-PCR方法测定）
• 5.9 肾组织sICAM-1的测定（双抗体夹心 ABC-ELISA法）
• 6.统计方法
• 结果
• 1.一般情况的观察
• 2.各组大鼠体重水平的变化
• 3.各组大鼠血糖水平的变化
• 4.各组大鼠血清SCR、BUN及CCR水平的变化
• 5.各组大鼠血清TG、TC水平的变化
• 6.各组大鼠24H尿蛋白定量的变化
• 7.各组大鼠尿视黄醇结合蛋白的变化
• 8.各组大鼠血清IL-6含量的变化
• 9.各组大鼠血清TNF-A含量和肾组织TNF-A MRNA PCR扩增产物的电泳情况
• 9.1 对各组大鼠血清TNF-α含量的变化
• 9.2 对肾组织TNF-α mRNA PCR扩增产物的电泳情况
• 10.各组大鼠肾小管间质OPNMRNA表达水平的变化
• 10.1 对肾小管间质OPNmRNA表达水平的影响
• 10.2 对肾小管组织OPNmRNA PCR扩增产物的电泳情况
• 11.各组大鼠肾脏sICAM-1表达水平的变化
• 小结
• 讨论
• 1.祖国医学对糖尿病肾病病名和病因病机的认识
• 1.1 对糖尿病肾病病名的认识
• 1.2 对糖尿病肾病病因病机的认识
• 2.祖国医学对DN血瘀证的微观研究及治疗
• 2.1 祖国医学对DN血瘀证的微观研究
• 2.2 祖国医学对活血化瘀法治疗DN的认识
• 3.现代医学对糖尿病肾病发病机制的认识
• 3.1 遗传易感因素
• 3.2 氧化应激（oxidative stress）的作用
• 3.3 糖代谢紊乱
• 3.4 细胞因子在DN发生中的作用
• 3.5 血流动力学异常和血液流变学因素
• 3.6 蛋白激酶C（PKC）的激活
• 4.本实验选择DN模型的依据
• 4.1 诱发性糖尿病肾病动物模型
• 4.2 自发性糖尿病肾病动物模型
• 4.3 基因工程糖尿病肾病动物模型
• 5.药物的选择
• 5.1 药物川芎嗪注射液的选择
• 5.2 ACEI类药物的选择
• 6.川芎嗪联合贝那普利对DN早期防治作用的机理探讨
• 6.1 中西医结合治疗DN的思路
• 6.2 川芎嗪联联合贝那普利对DN大鼠一般状态的影响
• 6.3 川芎嗪联联合贝那普利对DN大鼠血糖、血脂的影响
• 6.4 川芎嗪联合贝那普利对DN大鼠24h尿蛋白排泄率、尿视黄醇及肾功能的影响
• 6.5 川芎嗪联合贝那普利对DN大鼠肾组织炎性细胞的影响
• 6.6 川芎嗪联合贝那普利对DN大鼠肾小管间质损害保护作用及对OPN干预机理的探讨
• 结论
• 问题和展望
• 致谢
• 参考文献
• 附件一 中西医结合治疗糖尿病肾病的临床
• 附件二 中西医治疗糖尿病肾病的实验研究进展
• 附图
• 在读期间公开发表的学术论文