论文摘要
关于金黄色葡萄球菌的中毒事件，每年都有很多报道。目前关于金黄色葡萄球菌的研究主要集中在其致病机理方面，而国内关于金黄色葡萄球菌在食品中的分布及其致病基因在菌株中的分布规律研究报道较少，对于金黄色葡萄球菌引起的食品安全事件的菌源追溯和控制也就缺乏相应的依据。本研究主要从保定及石家庄区域采集各种样品，对样品中的金黄色葡萄球菌的来源分布进行鉴定，揭示金黄色葡萄球菌在样品中的分布特性；在此基础上，利用PCR技术检测金黄色葡萄球菌的毒素基因，分析不同毒素基因型菌株在各样品来源中的分布，探明不同毒素基因型的金黄色葡萄球菌与其来源之间的关系和规律性，一旦食品中检测出金黄色葡萄球菌或发生食物中毒，根据检出菌的毒素基因类型和环境毒素基因的分布，可以为金黄色葡萄球菌的检测、爆发流行的监控以及追踪污染源提供依据；并模拟自然培养条件，在以蛋白质为主的培养基中，金黄色葡萄球菌致病性基因转录表达的类别，及在不同金黄色葡萄球菌的转录表达是否存在差异，研究时序性表达差异，为判定金黄色葡萄球菌在所污染食品中的毒力提供初步依据。首先，本研究共采集样品799份，其中检出金黄色葡萄球菌的样品177份，平均检出率22.2%。所采集样品中以理发用具与人体化脓组织检出率最高，分别为52.0%与52.5%；其次为生鲜肉中的生鸡肉，检出率为44.8%；其余三种生鲜肉检出率类似，在18%-19%左右；生牛乳的检出率仅次于生鸡肉，为38.3%，速冻食品为35.1%，肉制品27.6%；生肉加工车间、水产品、果蔬、空气检出率类似，都在10%左右；豆制品检出率为4%，水与动物粪便检出率最低，未检出。从检出结果看，金黄色葡萄球菌在食品中的污染率相对较高，而且动物性蛋白食品的检出率远高于植物性蛋白食品，肉制品或不具备细胞结构的而营养丰富的动物性蛋白食品如生牛乳，检出率进一步升高。从污染来源来看，主要有两个途径：一是食品原料本身带菌，主要来源于动物组织或胴体，植物性原料一般污染较少；二是食品加工过程中金黄色葡萄球菌的污染。其次，本研究对金黄色葡萄球菌毒素基因在金黄色葡萄球菌中的分布做了研究，共检测了426株金黄色葡萄球菌中的14种基因。从结果看，不同毒素基因的分布规律与基因功能、菌株来源有密切关系。不同毒性基因在同一食品来源的金黄色葡萄球菌中的分布不同，而同一毒性基因在不同食品中的分布也不同。毒素基因在金黄色葡萄球菌中的分布与其同源性、遗传图谱及调控基因有关，但不能起决定作用，需要与外界环境条件结合才能决定其分布。毒素基因分布受外界环境条件的影响，营养条件、温度等都影响毒素基因的分布。最后，本研究对不同金黄色葡萄球菌菌株的毒素基因在营养肉汤培养基中的转录情况进行了研究。在同一培养条件下，毒素基因的转录表达存在菌株差异性，不同菌株表达的毒素种类不同，同一毒素在不同菌株中表达不同。金黄色葡萄球菌的溶血毒性的表达，体外培养就可诱导其毒素基因的转录表达，其诱导表达可能与培养基组成有关。大部分毒性基因的表达与报道一致，其产生规律取决于菌体生长过程或状态。肠毒素U、β溶血素、γ溶血素毒素基因的表达为持续性表达，在菌体生长的2h到12h都有表达，无需高密度菌体诱导就可表达。