斜生褐孔菌发酵条件的优化及发酵产物的初步研究

论文摘要

本论文对斜生褐孔菌Phaeoporus obliquus (Ach. ex Pers.) J. Schrot.的摇瓶培养工艺,发酵产物的活性物质含量,发酵产物的体外抗氧化、抑菌活性进行了系统研究。在本实验室前期的研究基础上,选取种龄、碳氮比、起始碳源浓度和氮源浓度、金属离子等四个影响因素进行摇瓶培养的单因素实验,结果表明,当种龄为15天,碳氮比在22：1—30：1范围内,起始氮源浓度2.5g/L,金属离子为MnSO4·H2O时,斜生褐孔菌的生物量和胞外多糖含量均较高。在此基础上进行正交实验,选用L16(45)正交实验表安排实验,筛选出了液体发酵生产菌丝体的最适培养基为葡萄糖55g/L大豆蛋白胨2.5g/L,MgSO4·7H2O 0.25g/L, KH2PO4 0.46g/L, K2HPO41.5 g/L, MnSO4·H2O 0.25 g/L,生产胞外多糖的优化培养基为葡萄糖70g/L,大豆蛋白胨2.5g/L, MgSO4·7H2O 0.25g/L, KH2PO4 1.38g/L, K2HPO42.0g/L, MnSO4·H2O 0.5 g/L。研究了斜生褐孔菌菌丝体中多酚和黄酮类化合物的提取方法,采用超声提取的方法,利用单因素实验研究了提取溶剂乙醇浓度、提取溶剂倍数、提取时间和提取温度对多酚和黄酮提取量的影响；在此基础上,采用L9(34)正交实验表安排实验,结果表明,多酚类化合物的最佳提取条件为乙醇浓度40%、提取时间45min、提取温度60℃、溶剂倍量25倍；黄酮类化合物的最佳提取条件为乙醇浓度40%、提取时间60min、提取温度60℃、溶剂倍量25倍。采用上述提取条件对斜生褐孔菌进行提取,用分光光度法测定了斜生褐孔菌菌丝体及菌核中多酚、黄酮和三萜类化合物的含量,结果为：菌丝体中多酚类化合物的含量为4.57mg/g,黄酮类化合物的含量为1.25 mg/g,三萜类化合物的含量为62.35 mg/g;在菌核中,多酚、黄酮、三萜类化合物的含量分别的8.94 mg/g,3.72 mg/g和53.12 mg/g。研究了影响斜生褐孔菌三萜类化合物含量的营养条件。结果表明,当碳源为可溶性淀粉,氮源为酵母膏时,适宜斜生褐孔菌积累三萜类化合物。在盐胁迫条件下,当盐浓度为0.1%和1.0%时,斜生褐孔菌中的三萜类化合物含量显著提高。研究并比较斜生褐孔菌发酵产物和菌核提取物的抗氧化活性。方法：采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取斜生褐孔菌发酵菌丝体和发酵液以及菌核中的有效成分,测定三个提取物中共10个组分的羟自由基清除率和DPPH自由基清除率。结果：斜生褐孔菌提取物对羟自由基和DPPH自由基均有清除活性,且乙酸乙酯组分和正丁醇组分的清除活性较强；斜生褐孔菌菌核提取物的抗氧化活性高于斜生褐孔菌发酵产物。结论：斜生褐孔菌发酵产物具有与菌核相似的抗氧化活性物质。研究并比较斜生褐孔菌发酵产物和菌核提取物的抑菌活性。采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取斜生褐孔菌发酵菌丝体和发酵液以及菌核中的有效成分,采用打孔法比较三个提取物中共10个组分的抑菌效果并测定了最低抑菌浓度(MIC)。结果表明斜生褐孔菌提取物对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌具有抑制作用,且乙酸乙酯组分和正丁醇组分有明显的抑菌效果,水提取组分均无抑菌活性；斜生褐孔菌发酵菌丝体提取物的抑菌活性与菌核提取物的抑菌活性相似。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1 斜生褐孔菌的研究进展
• 2 药用真菌代谢产物的调控方法
• 3 结语
• 参考文献
• 第二章 斜生褐孔菌的液体发酵培养条件的研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 3 实验结果
• 4 结论与讨论
• 参考文献
• 第三章 斜生褐孔菌发酵菌丝体与野生菌核中多酚、黄酮及三萜类化合物的含量比较
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 结果与分析
• 4 讨论
• 参考文献
• 第四章 营养条件和盐胁迫对斜生褐孔菌深层培养菌丝体中三萜类化合物积累的影响
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 3 结果与分析
• 4 结论与讨论
• 参考文献
• 第五章 斜生褐孔菌液体发酵产物及菌核提取物的体外抗氧化活性研究
• 1 引言
• 2 材料和方法
• 3 实验结果
• 4 结论与讨论
• 参考文献
• 第六章 斜生褐孔菌液体发酵产物及菌核提取物的抑菌活性研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 3 结果与分析
• 4 结论与讨论
• 参考文献
• 第七章 结论
• 致谢
• 作者简历