在异种移植中血红素氧化酶-1对内皮细胞的保护作用及其机制的研究

论文题目: 在异种移植中血红素氧化酶-1对内皮细胞的保护作用及其机制的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 外科学

作者: 宋宁

导师: 倪泉兴,张群华,芮晓晖,孙鹏

关键词: 异种移植,内皮细胞,血红素氧化酶,延迟性异种排斥反应,肝移植

文献来源: 复旦大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的目前,等待移植器官和组织的病人的量远远超过可得到的人类供体。因此,在过去的许多年里,跨物种间的移植,即异种移植再次引起人们的关注,异种移植被认为是解决日益严重的供体器官短缺的潜在方法,猪被认为是最合适的器官供者。猪器官移植至人是非协调性异种移植,这种移植首先遭遇的障碍是超急性排斥反应（HAR）,目前已随着转基因猪的出现而被初步克服。延迟性异种排斥（DXR）代表着下一个重要的免疫学障碍。研究表明,异种移植物引起的延迟性异种排斥反应与内皮细胞活化有关。另外,多种炎症细胞如NK细胞对移植物的识别、浸润和损害也是DXR的重要特征。血红素氧化酶（HO-1）是一种细胞保护基因,在多种应激和同种移植模型中起重要的作用。我们设想诱导内皮细胞表达HO-1能否抵抗异种血清的激活和诱导凋亡的作用,能否保护内皮细胞抵抗异种NK细胞的杀伤作用,进而延迟或阻止排斥反应的发生,以期对将来临床异种移植提供实验依据。方法实验中首先采用20%人血清（HS）刺激培养猪主动脉血管内皮细胞（PAEC）的方式作为猪对人异种移植的体外模型。通过100μM钴原卟啉（CoPP）预处理12h诱导PAEC过度表达HO-1,分别以Western印迹法和胆红素生成法检测HO-1的蛋白表达和酶的活性。PAEC的活化以共聚焦显微镜观察NF-κB的核转位和ELISA法检查E-选择素的表达来评价,从而比较HO-1对PAEC活化的抑制情况。对人血清诱导的PAEC凋亡情况,我们分别以TUNEL法和Annexin V-FITC/PI双染色FCAS法来检查,并以Western印迹法检查两种抗凋亡基因（A20与Bcl-2）的表达,来揭示两种基因在HO-1抗凋亡中的作用。NK细胞对PAEC的细胞毒作用采用Cr51释放法来判定,NK细胞的活性通过检查上清液中的IFN-?浓度来比较,以明确诱导PAEC表达HO-1对NK细胞杀伤作用的影响。我们进一步检查了HO-1在活体异种移植中抗排斥反应的作用。实验中采用豚鼠对大鼠异种肝移植模型,并进行了修改,与以往建立模型的方法在手术成功率及移植物再灌注方面进行了比较。我们采用注射眼镜蛇毒因子（CVF）的方法抑制HAR的发生,

论文目录:

摘要

中文摘要

英文摘要

英文缩略词表

概述

第一部分诱导HO-1抑制异种内皮细胞活化的研究

前言

材料和方法

结果

讨论

第二部分诱导HO-1抑制异种内皮细胞凋亡的研究

前言

材料和方法

结果

讨论

第三部分诱导PAEC表达HO-1对NK细胞直接细胞毒作用的影响

前言

材料和方法

结果

讨论

第四部分诱导HO-1在豚鼠对大鼠非协调性异种肝移植中作用的研究

第一节豚鼠至大鼠异种肝移植模型制作

前言

材料和方法

结果

讨论

第二节诱导HO-1表达对非协调性异种肝移植延迟性排斥作用的研究

前言

材料和方法

结果

讨论

总结

附录

参考文献

致谢

文献综述

论文独创性声明

论文使用授权声明

发布时间: 2005-09-19

参考文献

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在异种移植中血红素氧化酶-1对内皮细胞的保护作用及其机制的研究

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