多种抗氧化剂对NIH3T3细胞紫外损伤的保护作用研究

论文摘要

随着环境污染的日益严重,到达地球表面的紫外线日益增多,紫外线辐射会导致皮肤细胞的活性氧自由基增多,促进皮肤光老化、癌变、白内障、免疫抑制等一系列疾病的发生,因此寻找高效的抗氧化剂是预防和治疗紫外损伤的重要手段。本研究以NIH3T3细胞为实验材料,建立了紫外辐射对NIH3T3细胞的损伤模型,采用MTT方法和激光扫描共聚焦显微镜技术研究不同浓度的姜黄素、槲皮素、石杉碱甲对NIH3T3细胞的紫外损伤保护作用。结果表明,姜黄素预处理不但可以降低紫外损伤造成的细胞死亡率（p＜0.05）、减少细胞内活性氧的堆积（p＜0.05）,而且对细胞线粒体膜电位具有保护作用（p＜0.01）;此外,姜黄素对紫外损伤细胞的保护作用与浓度呈正相关。实验结果得出姜黄素可以清除细胞内的活性氧自由基,维持细胞的线粒体膜电位,提高紫外辐照细胞的存活率。通过不同浓度的槲皮素的预处理,紫外损伤后的细胞内活性氧自由基含量明显降低（p＜0.05）,阻止了细胞膜电位下降（p＜0.05）,提高了细胞存活率（p＜0.05）;且都呈现出较强的槲皮素浓度依赖性。结果表明紫外损伤可诱导细胞内产生大量的活性氧自由基,使细胞线粒体膜电位下降,降低细胞的存活率;槲皮素预处理,可以清除细胞内的活性氧自由基,维持细胞的线粒体膜电位,抑制细胞凋亡。经过不同浓度的石杉碱甲的预处理后的NIH3T3细胞,经紫外损伤后,其细胞死亡率降低（p＜0.05）、细胞内活性氧的含量减少（p＜0.01）,而且起到了对细胞线粒体膜电位的保护作用（p＜0.01）;同时,石杉碱甲预处理后的NIH3T3细胞的细胞核形态相对保持完整,细胞凋亡过程中的关键蛋白caspase-3的表达量下降（p＜0.01）,bcl-2的表达量增加（p＜0.01）,实验结果表明,石杉碱甲可以有效的清除NIH3T3细胞内的活性氧自由基,保护细胞线粒体的膜电位,通过调控蛋白表达,抑制由紫外辐射诱导的NIH3T3细胞凋亡,提高细胞存活率。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语
• 目录
• 引言
• 第一章 NIH3T3细胞的传代培养
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 材料
• 1.1.1.1 NIH3T3细胞
• 1.1.1.2 主要药品与试剂
• 1.1.1.3 主要仪器
• 1.1.1.4 试验用试剂的配制
• 1.1.2 实验方法
• 1.1.2.1 细胞传代培养
• 1.1.2.2 细胞冻存
• 1.1.2.3 细胞复苏
• 1.1.2.4 细胞计数
• 1.1.2.5 常用培养器皿的清洁及消毒
• 1.2 附图
• 第二章 UV辐射对NIH3T3细胞存活率的影响
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.1.1 NIH3T3细胞
• 2.1.1.2 主要药品与
• 2.1.1.3 主要仪器
• 2.1.1.4 试验用试剂的配制
• 2.1.2 实验方法
• 2.1.2.1 NIH3T3细胞的培养
• 2.1.2.2 紫外辐射
• 2.1.2.3 MTT检测
• 2.1.2.4 统计学处理
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 第三章 姜黄素对UV辐射NIH3T3细胞的保护作用
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.1.1 NIH3T3细胞
• 3.1.1.2 主要药品与试剂
• 3.1.1.3 主要仪器
• 3.1.1.4 实验用试剂的配制
• 3.1.2 方法
• 3.1.2.1 细胞培养
• 3.1.2.2 紫外辐射
• 3.1.2.3 MTT检测
• 3.1.2.4 细胞内活性氧检测
• 3.1.2.5 细胞线粒体膜电位检测
• 3.1.2.6 统计学处理
• 3.2 结果
• 3.2.1 姜黄素对非照射细胞的作用
• 3.2.2 姜黄素提高辐射细胞率
• 3.2.3 姜黄素对辐射细胞活性氧自由基的清除作用
• 3.2.4 姜黄素对辐射细胞线粒体膜电位的保护作用
• 3.3 讨论
• 3.4 附图
• 第四章 槲皮素对UV辐射NIH3T3细胞的保护作用
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.1.1 NIH3T3细胞
• 4.1.1.2 主要药品与试剂
• 4.1.1.3 主要仪器
• 4.1.1.4 试验用试剂的配制
• 4.1.2 方法
• 4.1.2.1 细胞培养
• 4.1.2.2 紫外辐射
• 4.1.2.3 MTT检测
• 4.1.2.4 细胞内活性氧检测
• 4.1.2.5 细胞线粒体膜电位检测
• 4.1.2.6 统计学处理
• 4.2 结果
• 4.2.1 槲皮素提高辐射细胞的存活率
• 4.2.2 槲皮素对辐射细胞活性氧自由基的清除作用
• 4.2.3 槲皮素对辐射细胞线粒体膜电位的保护作用
• 4.3 讨论
• 第五章 石杉碱甲对UV辐射NIH3T3细胞的保护作用
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.1.1 NIH3T3细胞
• 5.1.1.2 主要药品与试剂
• 5.1.1.3 主要仪器
• 5.1.1.4 试验用试剂的配制
• 5.1.2 方法
• 5.1.2.1 细胞培养
• 5.1.1.2 紫外辐射
• 5.1.2.3 MTT检测
• 5.1.2.4 细胞内活性氧检测
• 5.1.2.5 细胞线粒体膜电位检测
• 5.1.2.6 细胞核形态观察
• 5.1.2.7 caspase-3蛋白以及bcl-2蛋白表达量检测
• 5.1.2.8 统计学处理
• 5.2 结果
• 5.2.1 石杉碱甲对NIH3T3细胞的保护作用作
• 5.2.2 细胞内活性氧检测结果
• 5.2.3 细胞内线粒体膜电位检测结果
• 5.2.4 细胞核形态变化
• 5.2.5 蛋白表达量变化
• 5.3 讨论
• 5.4 附图
• 总结
• 参考文献
• 致谢