地方品系蛋鸡群中禽白血病病毒的鉴定和J亚群禽白血病病毒受体蛋白的分离

论文摘要

自1868年Roloff报道鸡淋巴肉瘤以来,禽白血病已分布于世界各地,我国也有自然病例发生。A、B亚群禽白血病病毒（ALV-A、ALV-B）引起的淋巴细胞性白血病是蛋鸡群中最常见的肿瘤。J亚群是1989年分离和鉴定,主要引起肉鸡髓细胞瘤。尽管实施了清除计划,实际上ALV在商品蛋鸡中仍无所不在,给养禽业带来巨大经济损失。近年来,ALV在我国养鸡业中呈流行趋势。本研究对地方品系蛋鸡群的ALV进行了分离和鉴定,对其前病毒基因组序列的变异进行了分析,同时对商品蛋鸡ALV-J受体进行了初步分离,为探索ALV-J致病机理提供了新材料。1.地方品系蛋鸡群中禽白血病病毒的鉴定将临床送检样本接种单层DF1细胞,37℃5%CO2培养箱中培养并维持7d,上清经p27抗原检测试剂盒检测,结果为阳性,证明从样本中分离到ALV病毒。收集感染细胞提取基因组DNA,根据ALV env基因序列设计引物,对分离毒进行基因扩增并测序,对测序结果进行分析,结果提示,分离病毒gp85序列与五株A亚群的同源性高达96%,与B、C、D、E亚群ALV的gp85的氨基酸同源性仅在82.7%-86.2%之间；而与J亚群gp85的氨基酸同源性更低,为27.5%～31.4%,为了进一步分析分离病毒的全基序列,采用分段PCR扩增法,并应用RACE技术对两侧末端序列进行扩增,对所有扩增结果进行拼接和全基因序列分析,结果证实从地方品系蛋鸡群中分离到1株ALV-A,序列分析表明,该地方品系蛋鸡群分离毒株与同种亚群分离毒的全序列没有明显差异,pol基因保守性极强,gag基因所编码的P10、P19和P15蛋白序列中,P19的突变相对较高；env中的gp37保守性较高,gp85的变异性较大。2. ALV-J受体蛋白的初步分离为了弄清中国蛋鸡群中ALV-J致病机理,本研究用膜蛋白提取试剂盒从SPF鸡肝脏和肾脏提取膜蛋白,以293细胞作为阴性对照,DF1细胞作为阳性对照。以融合蛋白SUJ-IgGFc-Beads结合物为工具,以免疫共沉淀的方法从膜蛋白分离ALV-J受体,经过SDS-PAGE后染色分析,结果发现在SPF鸡的肝脏细胞膜蛋白和肾脏细胞膜蛋白中存在与SUJ-IgGFc-Beads结合的蛋白,即存在ALV-J受体,分子量约90KD,与文献报道的蛋白chNHE1分子量相符,有关实验鉴定正在进行中。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 符号说明
• 综述
• 1 ALV的分类及其亚群
• 2 ALV的形态与结构
• 3 ALV的理化特性
• 4 ALV的基因组
• 5 ALV的蛋白
• 6 ALV的复制
• 7 ALV的致病机制
• 8 ALV的毒力转化
• 9 ALV的受体
• 10 ALV的免疫学特性
• 11 ALV的诊断
• 研究一：地方品系蛋鸡群中禽白血病病毒的鉴定
• 1. 材料与方法
• 2. 结果与分析
• 3. 讨论
• 研究二：J亚群禽白血病病毒受体蛋白的分离
• 1. 材料与方法
• 2 结果
• 3. 讨论
• 参考文献
• 致谢