牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒克隆纯化及其灭活疫苗的研究

论文摘要

我国自1999年暴发第五次口蹄疫病流行以来,至今仍未能有效地控制口蹄疫疫情,各省区散发和区域性流行现象不断出现,疫情形势异常严峻。我国现行口蹄疫灭活疫苗,由于毒株型别单一,生产工艺相对简单落后,导致疫苗免疫效力低,副反应大,对口蹄疫病的预防性较差,对现行口蹄疫灭活疫苗进行生产工艺改进,进一步提高抗原纯度,研制口蹄疫克隆纯化灭活疫苗已变得十分必要和迫切,特对其进行了以下研究:1.应用BHK21细胞通过蚀斑试验克隆和再次克隆牛Asia I型口蹄疫病毒毒株AKT03并对克隆前和第一次、第二次克隆的口蹄疫病毒毒株的细胞半数感染量(TCID50)、乳鼠半数致死量（LD（50））进行比较测定。结果表明,通过蚀斑试验成功的克隆了牛Asia I型口蹄疫AKT03毒株。口蹄疫Asia I AKT03毒株克隆后的蚀斑形成单位（3.0x107pfu/mL）比克隆前的蚀斑形成单位（7.2x106pfu/mL）提高了4倍。克隆后口蹄疫Asia I AKT03毒株的TCID50（5.5～6.5）和LD50（7.78～8.43）分别比克隆前TCID50（4.37～5.75）和LD50（6.88～7.43）明显提高,第一次克隆的毒株和第二次克隆的毒株的TCID50和LD50效价明显提高。这给制备口蹄疫疫苗提供了优质的抗原。2.应用牛口蹄疫Asia I AKT03克隆毒株研制牛Asia I型口蹄疫油乳剂灭活疫苗并对其物理性状、无菌检验、安全检验、免疫效力检测等进行了系统的研究。应用克隆毒株研制的Asia I型口蹄疫油乳剂灭活疫苗为乳白色,稳定、稀薄、无菌、安全,免疫效力检验结果表明克隆口蹄疫Asia I AKT03毒株疫苗的半数保护量(PD50)比普通疫苗提高2.4倍。因此,克隆毒株疫苗的免疫效力比普通疫苗明显提高。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 口蹄疫研究进展
• 1.1 口蹄疫概述
• 1.2 口蹄疫的历史及分布
• 1.3 口蹄疫的危害
• 1.4 病原
• 1.5 流行病学
• 1.6 临床症状及病理变化
• 1.7 诊断方法
• 1.8 免疫防治措施
• 第二章 牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒的克隆纯化
• 2.1 材料
• 2.1.1 口蹄疫毒株
• 2.1.2 试验用细胞
• 2.1.3 试验用乳鼠和豚鼠
• 2.1.4 试验用黄牛
• 2.1.5 试剂
• 2.1.6 BHK21细胞生长液和维持液配方
• 2.1.7 仪器设备
• 2.2 方法
• 2.2.1 牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒回归动物
• 21细胞的培养'>2.2.2 BHK₂₁细胞的培养
• 21细胞在6孔细胞培养板中培养'>2.2.3 BHK₂₁细胞在6孔细胞培养板中培养
• 21细胞上接种传代'>2.2.4 牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒在BHK₂₁细胞上接种传代
• 21细胞上的克隆纯化'>2.2.5 牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒在BHK₂₁细胞上的克隆纯化
• 2.2.6 牛AsiaⅠ型口蹄疫克隆纯化毒株的细胞培养
• 2.3 结果
• 2.3.1 牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒回归动物结果
• 21细胞上的接种传代结果'>2.3.2 牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒在BHK₂₁细胞上的接种传代结果
• 21细胞上蚀斑形成的结果'>2.3.3 牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒在BHK₂₁细胞上蚀斑形成的结果
• 21细胞上蚀斑形成结果'>2.3.4 牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒第2次克隆株在BHK₂₁细胞上蚀斑形成结果
• 50测定结果'>2.3.5 牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒TCID₅₀测定结果
• 50比较结果'>2.3.6 牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒克隆前后TCID₅₀比较结果
• 50测定结果'>2.3.7 牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒LD₅₀测定结果
• 50比较结果'>2.3.8 牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒克隆前后LD₅₀比较结果
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 第三章 牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒灭活苗的制备及免疫效果观察
• 3.1 材料
• 3.1.1 牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒细胞培养液
• 3.1.2 试验用FMD疫苗
• 3.1.3 试验用黄牛、乳鼠和小白鼠
• 3.1.4 试剂
• 3.1.5 器材
• 3.2 方法
• 3.2.1 疫苗的制备
• 3.2.2 半成品检验
• 3.2.3 疫苗的乳化配制和分装
• 3.2.4 成品检验
• 3.2.5 效力检验
• 3.3 结果
• 3.3.1 半成品检验结果
• 3.3.2 成品疫苗的检验结果
• 3.3.3 免疫效力测定结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介