卵母细胞体外成熟及人胚胎玻璃化冷冻的研究

论文摘要

1．探讨了不同大小水牛卵泡卵母细胞体外成熟过程中的减数分裂进程及其胚胎发育潜能。结果发现，不同大小水牛卵泡卵母细胞成熟速度存在明显差异，卵泡的体积越大，卵母细胞的体外成熟速度越快；2～6mm卵泡卵母细胞体外成熟后具有较高的胚胎发育潜能。2．探讨了表皮生长因子（EGF）浓度（0，10ng／ml，25ng／ml，50ng／ml，100ng／ml）对水牛卵母细胞体外成熟的影响。EGF对水牛卵丘细胞的扩展没有影响，但不同浓度的EGF均显著提高水牛卵母细胞的第一极体（PB1）排出率和孤雌激活后的囊胚孵化率，其中以25ng／ml的EGF效果最好。3．探讨了MEM维生素的浓度（0，0.2％，0.5％，1％，1.5％）对水牛卵母细胞体外成熟的影响。添加0.2％和0.5％的MEM维生素对水牛卵丘细胞的扩展没有影响，但显著提高卵母细胞孤雌激活后的囊胚发育率、囊胚孵化率和囊胚细胞数；然而，当浓度升高到1.0％或1.5％时，明显抑制卵丘的扩展和降低PB1的排出率。4．研究了人绒毛膜促性腺激素（HCG）浓度（0.75 IU／ml，2.5 IU／ml，5 IU／ml，7.5IU／ml）对水牛卵母细胞体外成熟的影响。HCG显著促进水牛卵丘细胞的扩展和PB1的排出，但对水牛卵细胞孤雌激活后的胚胎及囊胚细胞数没有影响。5．探讨了水牛和人无卵丘卵母细胞体外成熟的可行性。结果发现，未扩展卵丘细胞包围法和扩展卵丘细胞团支撑法可促进卵丘细胞与卵母细胞间的间隙连接重建，进而促进无卵丘水牛卵母细胞的体外成熟；与单层卵丘细胞共培养并不能促进无卵丘水牛卵母细胞的体外成熟；卵巢组织包围培养不能模拟体内卵巢的环境，且卵巢组织可能分泌抑制卵母细胞胞质成熟的因子；扩展卵丘细胞团支撑法能明显促进人无卵丘卵母细胞减数分裂的恢复，其成熟培养的无卵丘人卵母细胞显微受精后能发育成为正常囊胚；卵泡液有利于人卵丘细胞团三维结构的维持。6．探讨了玻璃化冷冻保存人4-8细胞胚胎的可行性及其临床应用价值。结果发现，胚胎承载器具和冷冻样品体积对人4-8细胞胚胎的玻璃化冷冻保存效果有显著影晌，冷冻样品的体积越小，其胚胎冷冻保存的效果越好，玻璃毛细管（GMP）的玻璃化冷冻保存效果优于拉细开口塑料细管，是一种可用于临床的人4-8细胞胚胎高效冷冻方法。7．探讨了胚胎培养结合玻璃化冷冻技术挽救人低评分胚胎的可行性。结果发现，第三天（D3）早期低评分胚胎不宜进行冷冻保存，但经过体外培养后部分胚胎能够形成囊胚，且这些囊胚可以玻璃化冷冻保存，解冻移植后能够获得健康婴儿。

论文目录

• 前言
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 哺乳动物卵母细胞体外成熟的研究进展
• 1 卵母细胞及卵泡的形成、发育和成熟过程
• 1.1 卵母细胞和原始卵泡的形成
• 1.2 卵母细胞和卵泡的生长和发育
• 2 卵母细胞成熟过程中的减数分裂进程
• 2.1 卵母细胞获能
• 2.2 成熟分裂阻滞
• 2.3 成熟分裂恢复
• 3 卵母细胞成熟过程中的激素及细胞因子调控
• 3.1 卵母细胞成熟过程中的激素调节
• 3.2 卵母细胞成熟过程中的细胞因子调节
• 4 卵丘细胞与卵母细胞的相互作用
• 4.1 卵丘细胞在卵母细胞成熟过程中的作用
• 4.2 卵丘细胞是生长因子作用于卵母细胞的介导因素
• 4.3 卵母细胞对卵丘细胞功能的影响
• 5 无卵丘卵母细胞体外成熟的研究
• 第二章 人胚胎玻璃化冷冻保存的研究进展
• 1 玻璃化冷冻保存的原理
• 2 抗冻剂的种类及其作用机制
• 2.1 渗透性防冻剂
• 2.2 非渗透性防冻剂
• 2.3 抗冻蛋白和热滞蛋白
• 3 胚胎玻璃化冷冻及解冻
• 3.1 胚胎玻璃化冷冻液
• 3.2 胚胎玻璃化的解冻
• 4 人胚胎玻璃化冷冻保存的发展历史与应用现状
• 4.1 原核期胚胎玻璃化法冷冻保存
• 4.2 卵裂期胚胎玻璃化法冷冻保存
• 4.3 囊胚玻璃化法冷冻保存
• 5 国内人胚胎玻璃化冷冻保存的研究概况
• 6 玻璃化冷冻胚胎的影响因素
• 6.1 玻璃化冷冻溶液和冷冻程序
• 6.2 冷冻和解冻速率
• 6.3 玻璃化冻存的预平衡
• 6.4 解冻和去玻璃化的避免
• 6.5 保护剂的洗脱
• 6.6 胚胎发育时期
• 第三章 水牛卵母细胞体外成熟过程中减数分裂进程的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 第四章 HCG、Vitamins及 EGF对水牛卵母细胞体外成熟的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 第五章 无卵丘的卵母细胞体外成熟方法的初步探讨
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 第六章 玻璃化冻存人早期胚胎的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 第七章 挽救人低评分胚胎的可行性探讨
• 1 方法与材料
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 英文缩写-中文对照表
• 附表
• 图片说明
• 博士期间发表的论文
• 致谢