论文摘要
干细胞移植治疗缺血性心肌病无论是动物实验还是临床实验均获得了较大的进展。然而,细胞移植后数小时内大量的供体细胞死亡严重制约了细胞治疗的疗效。心肌缺血微环境诱导的凋亡性死亡被认为是导致供体细胞大量丢失的一个主要因素。迄今为止,许多策略已经被探索用于提高移植细胞的存活,然而,这些策略或因其自身不足不能很好的提高供体细胞存活或因使受体产生一定的毒副作用而限制了其临床上的使用。溶血磷脂（Lysophospholipids,LPs）是简单的磷脂类,最初作为细胞膜生物合成中的组分而被识别。研究表明,溶血磷脂酸（Lysophosphatidic acid,LPA）和1-磷酸鞘氨醇（Sphingosine 1-phosphate,S1P）作为溶血磷脂家族中两个主要成员分别通过各自特异的G蛋白偶联受体参与调节多种重要的生理以及病理生理学过程。我们前期的研究表明,LPA能够拮抗缺氧无血清诱导的骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）凋亡,而LPA是否体内也有保护作用以及S1P作为LPA的同一个家族成员是否也能抗缺血诱导的MSC凋亡均不清楚。MicroRNA（miRNA）是近年来发现的进化上保守的非编码的小RNA,其以一种翻译抑制或mRNA降解的方式转录后调节基因表达。miRNA在生物体发育、细胞的增殖与凋亡、细胞分化、肿瘤形成等一系列的生命活动中均扮演着不可替代的角色。究竟miRNA在缺血诱导的MSCs凋亡的过程中扮演了怎样的角色,其通过何种机制参与MSCs的凋亡均未可知。本论文首先致力于LPA对移植的MSCs的保护作用体内实验的探讨;同时对另一种更有临床应用前景的脂质分子S1P对MSC的抗凋亡作用进行体内体外实验的详细研究。另外,我们对miRNA在缺血诱导的MSCs凋亡中的作用进行了初步研究。这些研究将有助于产生促进供体细胞存活的治疗新策略。本研究包括以下3部分内容:1、雌性SD大鼠左冠状动脉前降支结扎建立心梗模型,然后被随机分成3组,包括单纯DMEM注射组（Group1）,雄性MSCs注射组（Group2）和LPA预处理的雄性MSCs注射组（Group3）,细胞注射量为2x106。通过Real time-PCR技术检测SRY基因和TUNEL的方法评价移植细胞存活,结果表明LPA预处理提高了移植MSCs存活;而且免疫组化染色血小板内皮细胞粘附分子-1表明移植LPA预处理的MSCs促进了毛细血管的发生,同样体外实验也表明LPA促进了缺氧无血清条件下MSCs的VEGF分泌。超声心动图评价心功能揭示了LPA预处理的MSCs移植没有获得心功能的改善。以上数据表明,LPA预处理能够提高移植MSCs存活,增强其旁分泌作用,促进血管的发生,是一种有效地提高移植的MSC存活的策略。2、通过建立的缺氧无血清诱导的大鼠MSCs凋亡模型来评价S1P的抗凋亡作用。结果显示,S1P通过Gi蛋白偶联S1P1受体以及下游的Akt和ERK1/2信号通路浓度依赖性的拮抗了缺氧无血清诱导的MSC凋亡。体内实验方法同LPA一致,结果表明:在细胞移植1小时、1天和1周后,S1P处理组存活的MSCs明显多于无S1P处理组存活的MSCs;移植S1P处理的MSCs在1周后促进了心肌梗死区和周边区血管的发生。另外,S1P促进了缺氧无血清条件下VEGF的分泌,证明了其旁分泌作用的存在。以上数据表明,S1P处理MSCs是一种新的改善MSCs存活和促进血管发生的治疗策略。3、对0小时、1.5小时、6小时缺氧无血清处理的MSC做miRNA芯片分析,结果表明,随着时间进程,miR-503等4个miRNA表达逐渐升高;而miR-185等3个miRNA表达先升高再降低;miR-195等4个miRNA先降低再升高;miR-483等2个miRNA逐渐降低。Real-time PCR的方法验证上述芯片结果表明miR-503等4个miRNA表达升高,其中miR-337是我们芯片结果没有发现而我们验证时发现了其表达的异常升高;miR-122a等3个miRNA表达降低。统计学表明,miR-503和miR-337的上调以及miR-483的下调均具显著性差异。另外,在miRNA靶点寻找中,我们通过Western blot发现了miR-337的可能靶点为API5;VEGF的分泌受到了的miRNA调控。综上所述,本研究成果不仅探讨了抗缺血诱导的移植MSC凋亡的新的治疗策略而且还首次在miRNA水平上探索了MSCs发生凋亡的机制,为MSCs移植治疗缺血性心肌病提供了一个全新的思路和理论依据。
论文目录
相关论文文献
- [1].溶血磷脂的制备、分离、检测及应用研究进展[J]. 中国油脂 2018(06)
- [2].溶血磷脂的理化性质、制备方法及在畜牧业上的应用[J]. 福建畜牧兽医 2018(03)
- [3].大豆溶血磷脂的制备及其生物安全性分析[J]. 中国油脂 2019(06)
- [4].1-十一烯酰溶血磷脂的选择性合成与表征[J]. 武汉轻工大学学报 2015(02)
- [5].溶血磷脂与肾病相关研究进展[J]. 中国中西医结合肾病杂志 2013(03)
- [6].大豆溶血磷脂的制备及其对面包品质的影响[J]. 食品工业科技 2009(03)
- [7].大豆溶血磷脂对白羽肉鸡生长性能、肠道消化酶活性及脂肪沉积的影响[J]. 饲料工业 2018(22)
- [8].微创颅内血肿清除术后应用大剂量纳洛酮对脑出血患者血浆溶血磷脂类分子水平的影响[J]. 临床合理用药杂志 2015(22)
- [9].乳化剂溶血磷脂在猪和鸡生产中的应用[J]. 饲料工业 2019(13)
- [10].溶血磷脂类分子及其受体与多发性硬化的关系[J]. 中华脑科疾病与康复杂志(电子版) 2015(02)
- [11].阿托伐他汀对心房颤动患者血浆溶血磷脂类含量和卒中发生率的影响[J]. 中华实用诊断与治疗杂志 2008(10)
- [12].脑卒中病人血浆溶血磷脂分子含量的变化[J]. 齐鲁医学杂志 2010(02)
- [13].高糖高溶血磷脂胆碱对系膜细胞产生纤维连接蛋白、Ⅳ型胶原及转化生长因子-β1的影响[J]. 中国糖尿病杂志 2016(02)
- [14].亲水作用色谱串联质谱结合反相色谱串联质谱的油料磷脂轮廓分析[J]. 中国油脂 2020(09)
- [15].高糖高溶血磷脂胆碱环境下血小板活化因子在内皮细胞与系膜细胞相互关系中的作用[J]. 中国糖尿病杂志 2010(08)
- [16].大豆磷脂及溶血磷脂对肉鸡屠宰性能和肉品质的影响[J]. 中国家禽 2018(05)
- [17].拟南芥叶片衰老过程中细胞溶血磷脂和膜脂不饱和度的变化(英文)[J]. 植物分类与资源学报 2013(05)
- [18].羟喜树碱脂质体中药物对磷脂稳定性的影响[J]. 药学与临床研究 2009(04)
- [19].浅谈溶血磷脂在畜牧业上的应用[J]. 江西饲料 2015(06)
- [20].溶血磷脂酰基转移机理及有效影响因子研究[J]. 有机化学 2014(12)
- [21].肝脏X受体(LXR)调控溶血磷脂胆碱酰基转移酶3(LPCAT3)的研究[J]. 中国畜牧兽医 2011(03)
- [22].水相体系中磷脂酶A_1酶解南极磷虾磷脂制备溶血磷脂的分析[J]. 食品科学 2019(12)
- [23].碾磨方式和米粉粒径对稻米溶血磷脂含量的影响[J]. 核农学报 2018(01)
- [24].阿司匹林和阿托伐他汀对心房颤动患者血浆溶血磷脂类含量和卒中发生率的影响[J]. 中华脑血管病杂志(电子版) 2008(02)
- [25].普伐他汀钠对外源性溶血磷脂胆碱致心肌损伤的保护作用[J]. 中国病理生理杂志 2010(10)
- [26].超高效液相色谱-串联质谱法测定圆椒中甘油磷脂含量[J]. 食品科学 2019(22)
- [27].勘误启示[J]. 中国糖尿病杂志 2016(03)
- [28].包载共轭亚油酸-紫杉醇的iRGD修饰的含溶血磷脂的温敏脂质体的细胞摄取和抗肿瘤药效（英文）[J]. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences 2019(02)
- [29].酶法制备溶血磷脂的研究进展[J]. 农业机械 2012(06)
- [30].四物汤对辐射致血虚证小鼠作用的代谢组学研究[J]. 中国中药杂志 2012(09)