一株产植酸酶菌株的选育

论文摘要

植酸酶的研究已经有近百年的历史，到目前为止，国内外对植酸酶的研究已经深入到了饲料、食品、医药等多个领域，并且都取得了一定成果。美国、芬兰、荷兰和德国等国家已经推出了多种植酸酶制剂；国内的一些学者在植酸酶的研究上也取得了一定成果，然而，在应用的过程中依然存在很多问题。因此，有必要进一步选育新的产植酸酶菌株，最终获得具有实际应用价值的生产菌株。本研究主要做了以下工作：1．从6份土壤样品和1份酒糟样品中筛选出61株产植酸酶的菌株，挑选一株透明圈直径与菌落直径比值最大的菌株为出发菌株，对其进行形态学鉴定和18S rRNA基因序列分析，结果表明该菌株属于散囊菌目（Eurotiales），发菌科（Trichocomaceae），蓝状菌属（Tarlaromyces）的黄蓝状菌（Tarlaromyces flavus），其18S rRNA基因与标准菌株相似性为100％。2．对所选取的菌株进行产酶条件优化和酶学性质研究。最适培养基组成为：葡萄糖6％；胰蛋白胨0.2％；（NH4）2SO4 0.5％；KCl 0.05％；MgSO4·7H2O 0.05％；FeSO4·7H2O 0.004％；MnSO4·H2O 0.004％。最适发酵产酶条件为：培养温度32℃；发酵培养基最适pH5.5；装液量50ml（500ml锥形瓶）：接种量2％；摇床转速80r／min；培养时间8d。对酶学性质进行研究的结果为：最适反应温度55℃；最适反应pH5.5；最适反应时间10min。最终酶活达到294U／ml。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1 植酸酶的来源和分类
• 1.1 植酸酶的分类
• 1.2 来源
• 1.2.1 植物来源植酸酶
• 1.2.2 动物来源植酸酶
• 1.2.3 微生物来源植酸酶
• 2 植酸酶的研究意义
• 2.1 植酸酶在饲料添加剂方面的作用
• 2.1.1 提高植酸磷的利用率,降低环境污染
• 2.1.2 提高饲料中蛋白质、氨基酸和碳水化合物的利用率,提高动物生产性能
• 2.1.3 提高对矿物元素的生物利用率
• 2.2 植酸酶在生化制药方面的作用
• 2.3 植酸酶在食品加工方面的作用
• 3 国内外微生物植酸酶选育的研究进展和展望
• 3.1 细菌植酸酶研究进展
• 3.2 真菌植酸酶的研究进展
• 3.3 前景展望
• 4 植酸酶酶活性的测定方法
• 4.1 丙酮-磷钼酸铵法
• 4.2 硫酸亚铁-钼蓝法
• 4.3 维生素C-钼蓝法
• 4.4 钒-钼酸铵法
• 5 本研究的目的和意义
• 第二章 一株产植酸酶菌株的分离鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 样品
• 1.1.2 主要化学试剂
• 1.1.3 培养基
• 1.1.4 主要仪器设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 菌株的分离和筛选
• 1.2.2 形态学鉴定
• 1.2.3 菌株的DNA提取
• 1.2.4 PCR扩增18S rDNA序列
• 1.2.5 18S rRNA基因序列分析
• 2 结果及分析
• 2.1 菌株的分离和筛选
• 2.2 形态学鉴定
• 2.2.1 察氏培养基
• 2.2.2 麦芽汁培养基
• 2.2.3 分生孢子
• 2.3 18S rDNA序列测定和分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 产酶条件优化和酶学性质研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 菌株
• 1.1.2 主要化学试剂
• 1.1.3 培养基
• 1.1.4 缓冲液的配制
• 1.1.5 主要仪器设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 菌株液体发酵培养方法
• 1.2.2 粗酶液的获得
• 1.2.3 酶活性的测定
• 1.2.4 产酶条件优化
• 1.2.5 酶学性质研究
• 2 实验结果
• 2.1 磷标准曲线
• 2.2 发酵产酶条件优化
• 2.2.1 初始发酵产酶曲线
• 2.2.2 碳源的选择
• 2.2.3 氮源的选择
• 4·7H₂O和KCl浓度的选择'>2.2.4 MgSO₄·7H₂O和KCl浓度的选择
• 4·7H₂O和MnSO₄·H₂O浓度的选择'>2.2.5 FeSO₄·7H₂O和MnSO₄·H₂O浓度的选择
• 2.2.6 正交试验
• 2.2.7 接种量的选择
• 2.2.8 装液量的选择
• 2.2.9 初始pH值的选择
• 2.2.10 培养温度的选择
• 2.2.11 最终发酵曲线
• 2.3 酶学性质
• 2.3.1 不同温度对酶活性的影响
• 2.3.2 不同反应时间对酶活性的影响
• 2.2.3 不同缓冲液pH值对酶活性的影响
• 2.3.4 酶的稳定性
• 2.3.5 酶对pH的稳定性
• 2.3.6 金属离子对酶活性的影响
• 3 结论
• 4 小结
• 参考文献
• 致谢
• 附录（攻读硕士学位期间取得的成果）