杜仲叶多糖的提取分离及生物活性研究

论文摘要

杜仲（Eucommia ulmoides Oliv）是中国特有的名贵经济树种,是杜仲科,杜仲属植物,地质史上第三纪冰川运动残留下来的古生树种,唯一的一科一属落叶乔木。现代医学研究证明,杜仲干皮具有补肝虚、强筋骨、调血压、防衰老、抗氧化、抗肿瘤、增强机体免疫力等功效。近年来的研究表明杜仲皮和叶具有类似的化学成分和药理作用,但也有资料提及杜仲叶中还含有杜仲皮中所没有的活性成分,使得杜仲叶具有新的开发利用价值。此外,杜仲皮中含有的杜仲多糖可增强机体非特异性免疫功能,具有抗感染症剂和脑代谢促进剂,可抑制后天性免疫缺陷性病毒细胞的吸附和增殖,预防和治疗艾滋病的感染,长期服用也无副作用,但目前国内外对杜仲叶多糖的研究还仅限于含量检测。杜仲的多种药理作用和生理功能引起了人们的广泛关注。本研究对杜仲叶和杜仲皮的化学成分作了全面的比较;系统研究了杜仲叶多糖的提取分离方法以及清除自由基的性能,并且初步研究了杜仲叶多糖的抗肿瘤、抗补体的活性。研究表明,杜仲叶多糖具有很高的抗补体活性,为杜仲叶的药用开发奠定了基础。通过研究得出结论:1.杜仲叶和杜仲皮中的化学成分在含量上存在差异,在分级萃取的不同萃取溶剂中所含的化学成分不尽相同,差别最大的主要表现在极性较大的成分上,这一部分物质中杜仲叶中含有一些在杜仲皮中未曾出现的化学成分。2.热水提取杜仲叶多糖的最佳提取工艺为:料液比1:20,提取温度100℃,浸提时间120min,在此条件下粗多糖的提取率可达3.713%;采用Sevag法除蛋白;脱色方法为:大孔吸附树脂D4020为脱色剂、室温（20～25℃）、原糖液（pH=5.4～6.44）条件下脱色、动态脱色流速为3BV/h。3.DEAE-纤维素层析柱对杜仲叶多糖进行组分分离,检测到杜仲叶6种多糖组分。0.1mol/L NaCl洗脱出现4个峰,0.2、0.3mol/L NaCl洗脱各出现一个峰。0.2mol/L NaCl洗脱出的组分在多糖中含量最高。此外实验中用0.0、0.4、0.6、0.8、1.0mol/L的NaCl洗脱时未见有多糖检出。4.杜仲叶多糖具有清除羟自由基和超氧阴离子自由基的能力,且清除羟自由基的能力显著大于清除超氧阴离子的能力;粗多糖的清除能力高于精多糖的清除能力。5.杜仲叶多糖对人白血病细胞株K562和人非小细胞肺癌细胞株A549不存在直接的杀伤作用;6.杜仲叶多糖具有明确的抗补体活性,且在一定范围（0.03～1.67mg/mL）内呈量效关系。

论文目录

• 目录
• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 杜仲资源的价值与开发现状
• 1.2 杜仲叶中活性成分研究
• 1.2.1 杜仲叶与杜仲皮的比较研究
• 1.2.2 杜仲叶中的活性成分
• 1.3 活性多糖的研究进展
• 1.3.1 多糖的来源与分布
• 1.3.2 多糖的化学组成与结构
• 1.3.3 多糖的生物活性
• 1.4 本课题研究的现状、意义和内容
• 第二章 杜仲叶和杜仲皮中化学成分的比较
• 2.1 材料与设备
• 2.1.1 实验材料与试剂
• 2.1.2 实验主要仪器设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 供试样品溶液的制备
• 2.2.2 色谱条件
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 水相中溶液中含有的物质
• 2.3.2 正丁醇相萃取溶液中含有的物质
• 2.3.3 乙酸乙醋相萃取溶液中含有的物质
• 2.3.4 正己烷相萃取液中溶解的物质
• 2.4 本章小结
• 第三章 杜仲叶粗多糖提取分离的研究
• 3.1 材料与设备
• 3.1.1 实验材料与试剂
• 3.1.2 实验主要仪器设备
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 多糖含量与蛋白质含量标准曲线的绘制
• 3.2.2 杜仲叶多糖提取方法研究
• 3.2.3 杜仲叶多糖沉淀
• 3.2.4 杜仲叶多糖脱蛋白
• 3.2.5 杜仲叶多糖脱色
• 3.2.6 杜仲叶多糖组分分离
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 多糖含量与蛋白质含量标准曲线
• 3.3.2 杜仲叶多糖提取方法研究
• 3.3.3 杜仲叶多糖沉淀方法研究
• 3.3.4 杜仲叶多糖脱蛋白研究
• 3.3.5 杜仲叶多糖脱色研究
• 3.3.6 杜仲叶多糖的组分分析
• 3.4 本章小结
• 第四章 杜仲叶多糖的生物活性
• 4.1 杜仲叶多糖抗氧化活性
• 4.1.1 材料与设备
• 4.1.2 实验方法
• 4.1.3 结果与讨论
• 4.2 杜仲叶多糖抗肿瘤及抗补体活性
• 4.2.1 抗肿瘤活性
• 4.2.2 抗补体活性
• 4.2.3 结果与讨论
• 4.3 本章小结
• 第五章 总结与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 论文发表情况