侵袭性牙周炎患者外周血白细胞中CD8B1的表达

侵袭性牙周炎患者外周血白细胞中CD8B1的表达

论文摘要

侵袭性牙周炎(Aggressive periodontitis,AgP)是发生于全身健康者的进展迅速、有家族聚集性的一类牙周炎,是造成健康年轻者牙齿迅速脱落的主要原因之一。AgP临床界定标准模糊,病因尚未完全清楚。虽然,某些具有特殊致病毒力的微生物是AgP发病的重要致病因子,但越来越多的证据表明AgP是一个多因素疾病。目前认为AgP的病因包括宿主易感因素、环境危险因素和致病微生物等,其中宿主易感因素主要由易感遗传基因所影响,且研究认为AgP患者可能存在细胞免疫应答功能障碍。前期研究通过基因芯片技术发现与对照组相比,AgP患者外周血白细胞中的部分基因表达上调,还有一部分基因表达下调。本研究从下调基因组中选出了与免疫反应紧密关联的CD881和TPD52L2进行荧光定量PCR和Western-blot检测,以推进后期关于侵袭性牙周炎的病因及发病机制的研究发展。目的:对CD881和TPD52L2两个在基因芯片检测结果中表达异常的基因进行荧光定量PCR和Westem-blot检测,以检测它们的基因表达水平及蛋白表达水平,从而验证基因芯片检测结果,推进后期关于侵袭性牙周炎的病因及发病机制的研究发展。方法:每个实验对象各抽取10ml外周静脉血,分离白细胞。利用荧光定量PCR技术检测两个基因-CD881和TPD52L2的基因表达水平,挑出了与基因芯片检测结果一致较高的CD881进行Western-blot实验以测定其蛋白表达水平。结果:同对照组相比,AgP患者外周血白细胞中CD881无论在基因表达水平或蛋白表达水平都表现为下调(0.47倍),与基因芯片检测结果一致(0.11倍);TPD52L2的荧光定量PCR检测显示其在AgP外周血白细胞中表达上调(1.58倍),与基因芯片检测结果(3.10倍)相差较大,故未选择其进行下一步实验。结论:AgP患者外周血白细胞中基因表达水平的差异可能与AgP的发病机理有关。AgP患者的CD881的表达水平的降低可能与AgP的基因易感性有关。但两者的确切相关性还应进一步研究。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 前言
  • 1 牙周病分类与AgP
  • 1.1 AgP简介
  • 1.2 AgP病因的研究回顾
  • 1.3 外周血白细胞与AgP
  • 2 CD8B1和TPD52L2的基因背景
  • 材料与方法
  • 1 材料
  • 2 方法
  • 2.1 外周血白细胞中CD8B1和TPD52L2的RNA转录水平的研究
  • 2.1.1 白细胞分离
  • 2.1.2 总RNA的提取和测定
  • 2.1.3 总RNA中基因组DNA的消化及cDNA的合成
  • 2.1.4 引物设计及cDNA合成质量的检测
  • 2.1.5 荧光定量PCR
  • 2.1.6 定量数据统计分析
  • 2.2 外周血白细胞中CD8B1的蛋白表达水的平研究
  • 2.2.1 材料
  • 2.2.2 方法
  • 结果
  • 1 白细胞抽提结果
  • 2 CD8B1和TPD52L2的RNA转录水平检测结果
  • 2.1 总RNA的提取
  • 2.2 表达谱探针cDNA第一链质量检测
  • 2.3 CD8B1和TPD52L2荧光定量PCR结果
  • 3 CD8B1的蛋白表达水平检测结果
  • 3.1 外周血白细胞的总蛋白抽提检测
  • 3.2 蛋白浓度测定结果
  • 3.3 Western-blot检测结果
  • 讨论
  • 1 荧光定量PCR结果与基因芯片结果一致性研究
  • 2 CD8B1翻译水平与AgP相关性分析
  • 3 TPD52L2与AgP相关性
  • 4 研究展望
  • 小结
  • 参考文献
  • CD8相关研究进展
  • 致谢
  • 相关论文文献

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