论文摘要
目的逐年分析金黄色葡萄球菌对万古霉素的MIC值变化情况,评估其万古霉素MIC漂移趋势,了解VraSR双组份系统在金黄色葡萄球菌对万古霉素敏感性降低中的作用。方法收集2007-2009年重庆和广州地区四家三甲医院临床分离的MRSA菌株,重庆的医院为A院,广州地区三家医院分别为B院、C院、D院。微量肉汤稀释法测定万古霉素MIC ,计算MIC50,MIC90,MIC值几何均数,敏感率及耐药率,分析其MIC变化趋势。然后,对MRSA菌株进行PCR检测vraSR基因,测序分析,并通过genebank的Blast与N315基因组比对分析,了解其基因有无氨基酸突变。另外,体外用低剂量万古霉素诱导MRSA临床菌株,对亲本菌株及诱导后不同MIC值阶段的菌株检测vraSR基因,分析有无氨基酸突变,行RT-PCR检测vraSR基因表达量变化。结果2007年至2009年,临床分离MRSA菌株共779株,其中2007年264株,2008年342株,2009年173株。研究总体对万古霉素MIC几何均值为0.911、0.954、0.976μg/ml,呈逐年上升趋势,（P<0.001）,在各个医院中,A院MIC几何均值分别为1.052、1.06、1.069μg/ml,呈逐年上升趋势（ P<0.001）。B院MIC几何均值分别为0.885、0.901、1.006μg/ml,呈逐年上升趋势（ P<0.001）。C院MIC几何均值分别为0.915、0.954、0.926μg/ml,无逐年上升趋势（ P>0.05）。D院MIC几何均值分别为1.025、1.001、0.865μg/ml,无逐年上升趋势（ P>0.05）。MRSA菌株均检测出双组份系统vraSR基因。1株MIC=2μg/mL的MRSA菌株vraR的第59位谷氨酸突变为天冬氨酸。对10株MRSA进行万古霉素体外诱导实验,4天后5株菌株MIC值由0.75μg/ml上升为2μg/ml,6天后1株菌株MIC值从2μg/ml上升为4μg/ml,12天后3株株菌株MIC值从2μg/ml上升为4μg/ml,1株菌株MIC值仍为2μg/ml,其余5株MIC值仍为0.75μg/ml。诱导后的不同阶段菌株vraSR基因未发现突变,vraR基因表达量随MIC值上升而增加。结论总体MRSA菌株的万古霉素MIC存在漂移趋势。其中,A院和B院可见漂移趋势,C院和D院未见漂移趋势。所有MRSA菌株均检测出双组份系统vraSR基因,发现一例vraR基因突变。在万古霉素体外诱导下,MRSA对万古霉素的MIC可由0.75μg/ml达到4μg/ml,同时菌株的vraR表达量也随MIC值增加而上调,但未发现vraSR基因突变。