论文摘要
本研究对鸡病毒性关节炎病毒（ARV）鸡胚增殖特性进行了探索，建立了检测该病抗体的间接ELISA方法，为开展该病的病原分离鉴定、疫病诊断和流行病学调查奠定了基础。种毒经鸡胚增殖后收集尿囊膜毒、尿囊液毒、卵黄液毒和胚体毒，再分别接种卵黄囊，以胚体毒致死鸡胚的时间最短，尿囊膜毒致死鸡胚的时间最长；病毒经氯仿处理后接种卵黄囊，鸡胚死亡时间比未经氯仿处理的对照组推迟15h，说明病毒对氯仿具有一定的敏感性；病毒经卵黄囊、尿囊腔和尿囊膜3种途径接种鸡胚，最早死亡时间分别为51h、53h和56h。将ARV鸡胚毒分别用50％饱和（NH4）SO4沉淀、10％PEG6000沉淀和差速离心纯化，测得蛋白含量分别为8.699mg／ml、17.684mg／ml和5.35mg／ml，其中，前2种方法杂蛋白含量相对较高。差速离心的样品，电镜下观察到了大量规则排列的病毒粒子，无囊膜，有双层衣壳，直径约为75nm。以差速离心纯化的病毒作为包被抗原，建立了检测ARV抗体的间接ELISA方法，确定了抗原最佳包被浓度为252μg／ml，1％BSA封闭1.5h，血清最佳工作浓度为1：160，37℃反应1.5h，酶标兔抗鸡的稀释度为1：5000，37℃作用1h，底物37℃作用15min。特异性试验结果表明，NDV、IBDV、支原体的阳性血清OD值均小于ARV阴阳性血清的临界值，与抗原没有交叉反应；未加ARV抗原阻断的对照ARV阳性血清的OD值大于抗原阻断的阳性血清的OD值，而加ARV抗原阻断的各稀释度的阴性血清OD值较接近；人工感染鸡在接种ARV鸡胚毒7d、15d、20d和25d用间接ELISA进行抗体检测，均能检出血清抗体阳性，能检出血清的最高稀释倍数为1：640，比对照试验具有更高的敏感性。
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标签：鸡病毒性关节炎病毒论文; 培养论文; 间接论文; 抗体论文;