论文摘要
肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是世界范围内常见的恶性肿瘤之一,具有较高的发病率与死亡率。在我国,肝癌在所有恶性肿瘤的死因中居第二位。研究证明,侵袭和转移是导致肝癌病人预后不良的主要原因,如何预测和治疗肝癌的复发和转移是当今肝癌研究的重点之一。既往有关趋化因子受体（chemokine receptor）功能的研究主要集中在其介导炎症过程中的作用,近年的研究发现在恶性肿瘤中存在多种趋化因子,瘤细胞也表达相应趋化因子受体,它们对肿瘤的发展和演进起着重要而复杂的作用。研究显示,一些表达在正常细胞的与特定生理或病理过程相关的趋化因子受体也可能表达于肿瘤细胞,而且在肿瘤演进中发挥作用。肿瘤演进是复杂的过程,涉及瘤细胞和宿主多方面、多阶段的相互作用。其中,瘤细胞的增殖和运动能力增强、释放蛋白水解酶增多、产生过多的促血管生成因子等重要改变,以及在瘤细胞与宿主相互作用过程中其调节紊乱是重要的研究内容,有关的受体也可能作为新的治疗措施的靶点。甲酰肽受体家族（Formylpeptide receptor,FPR,1976年发现）是主要表达在吞噬细胞表面的一类七次跨膜、G蛋白偶联受体,包括甲酰肽受体（FPR）、类甲酰肽受体1（FPRL1）和类甲酰肽受体2（FPRL2）。FPR与激动剂结合可以使PI3K,NF-κB和MAPK等激活,调节细胞的活化和移行。FPR主要高表达于吞噬白细胞,但在很多正常的组织和细胞上呈阳性表达,如上皮细胞、肝脏以及库弗细胞、脑组织及脊髓等等。有研究发现, FPR与胶质瘤级别和微血管密度密切相关,即它可能具有促进肿瘤生长和血管生成的功能。但其促血管生成作用机制和治疗学意义尚需探讨。根据我们前期的实验结果以及前人报道,在肝细胞上可检测到FPR的表达。但是肝细胞上表达的FPR发挥何种生物学作用,以及FPR在肝癌细胞中的表达情况,需要进一步探讨。为了进一步确定在肝癌细胞上的FPR表达情况,以及FPR是否在肝癌的增殖和迁移中有作用,我们对人肝癌细胞系HepG2以及Hep3B上FPR的表达情况以及肝癌组织上FPR的表达进行了研究,并对FPR在肝癌移行和血管增生中的可能作用机制进行了初步探索。首先,我们检测了人肝癌细胞系HepG2以及Hep3B中FPR在mRNA以及蛋白水平的表达,然后,进一步检测FPR被激活剂fMLF活化后促进肝癌细胞迁移和炎症细胞因子IL-8产生的作用,我们还检测了FPR活化后,细胞外信号调节激酶（eatra cellular signal-regulated protein kinase,ERK）的磷酸化情况。最后,我们研究了肝癌组织上FPR的表达分布情况。主要结果和结论如下:1.采用RT-PCR和流式细胞术的方法检测了肝癌细胞株HepG2和Hep3B培养细胞中FPR的mRNA以及蛋白水平表达情况,结果显示,这两株细胞中,有FPR mRNA的表达。流式检测结果表明,HepG2和Hep3B细胞表面均有FPR蛋白的表达,但是Hep3B上FPR蛋白表达量稍小于HepG2细胞。2. fMLF对HepG2以及Hep3B均有趋化作用,且与fMLF的浓度呈剂量依赖性,在浓度为10-7M时,趋化作用最高,细胞的迁移率最大。说明在细胞外环境中有FPR激活剂的时候,FPR被激活后可以介导肝癌细胞迁移。由Western Blot分析可知,FPR被激活后,MAPK/ERK信号通路被活化,ERK磷酸化,从而参与细胞的增生和分化。3. FPR被激活剂fMLF刺激活化后,细胞分泌IL-8增加,而IL-8可促进肿瘤血管生成,提高肿瘤生长速率,促进转移。说明,FPR可能通过促进肝癌细胞分泌IL-8,从而对肿瘤的迁移和增生发挥作用。4.肝癌组织石蜡切片免疫组化结果显示,在癌巢以及癌旁组织上均有FPR的表达,主要表达于细胞膜上。提示FPR在肝癌的增生以及迁移中可能发挥重要作用。
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标签：肝细胞癌论文; 趋化因子受体论文; 甲酰化肽受体论文; 白细胞介素论文; 细胞外信号调节激酶论文;