蕨麻对低压缺氧大鼠的保护作用及脑红蛋白表达的影响

论文摘要

目的:建立大鼠低压缺氧损伤（hypobaric hypoxic injury, HHI）模型,研究蕨麻醇提物对大鼠急性低压缺氧损伤的保护作用,以及对脑红蛋白（Neuroglobin, Ngb）表达的影响。方法:选取雄性SD大鼠78只,随机分为正常对照组（C）、损伤模型组（M）、蕨麻醇提取物3.6g/kg（H）,1.8g/kg（I）,0.9g/kg（L）干预组。连续灌胃给药14天后,持续缺氧12h,压力-0.06Mpa（相当于海拔约7000m）。H.E常规染色探讨大鼠HHI后心、脑、肾脏的形态学变化;采用ELISA方法检测血清中ET-1及CGRP含量变化;采用透射电镜技术检测神经元超微结构的变化;干湿比重法检测各组大鼠脑含水量变化;免疫组化检测Ngb蛋白表达的定位,RT-PCR和Western Blot方法分别检测大脑皮质Ngb mRNA及蛋白表达水平。结果:1、蕨麻醇提物对大鼠HHI后保护作用:（1） H.E染色观察心、脑、肾形态学改变:模型组大鼠心肌纤维排列紊乱,出现片状嗜酸性变,可见波浪状损伤,局部出现炎细胞浸润;蕨麻3.6g/kg组损伤明显减轻,肌纤维排列基本整齐,偶见点状嗜酸性染色,未见炎细胞浸润及波浪状损伤。模型组大鼠脑冠状切片H.E染色可见海马各区细胞均以坏死和凋亡为主,可见大部分细胞固缩变形,胞浆深染,轴突断裂或消失。顶叶皮质神经元水肿明显,细胞固缩,轴突断裂或消失,凋亡;蕨麻醇提物3.6g/kg和1.8g/kg组,海马各区神经元损伤程度减轻,形态接近较正常组,胞浆均匀饱满,淡染。核仁明显,细胞排列均一。模型组肾小球近曲小管上皮细胞内有大量大小不等的圆形红染小滴（玻璃样变性）。蕨麻3.6g/kg组未见玻璃样小滴沉积。（2）神经细胞超微结构变化:损伤后,神经元胞质高度水肿,细胞器数量明显减少,排列紊乱、散在;线粒体大部分脊和膜融合、消失;粗面内质网脱颗粒现象严重,部分双层核膜融合、消失;细胞核、质水肿。蕨麻3.6g/kg组细胞器未见明显病理改变,损伤程度明显减轻。（3）脑含水量变化:损伤后脑含水量平均值（75.05±3.6%）,与正常组（68.04±0.6%）相比有统计学差异（P<0.01）。蕨麻醇提物3.6g/kg能明显降低大鼠脑含水量（P<0.01）。（4） ELISA实验检测HHI后大鼠血清ET-1与CGRP含量变化:模型组大鼠血清ET-1含量显著升高（P<0.01）,CGRP含量显著降低, ET-1/CGRP比值显著高于正常组。各蕨麻醇提物干预组均能明显降低损伤后大鼠血清中ET-1的含量（P<0.01）。蕨麻醇提物3.6g/kg和1.8g/kg组大鼠血清CGRP含量较模型组显著增加（P<0.01）。其中3.6g/kg组血清ET-1/CGRP比值与正常组无明显差异（P>0.05）。2、蕨麻醇提物对HHI大鼠Ngb表达影响:（1）免疫组化:正常对照组仅见皮质神经元有少量Ngb表达,阳性反应产物为棕黄色颗粒,海马各区未见Ngb表达。模型组皮质Ngb蛋白表达量明显增加,阳性细胞数增多,胞浆、胞核均可见棕黄色颗粒的表达（P<0.01）。海马各区未见Ngb表达。与模型组相比,蕨麻醇提物3.6g/kg和1.8g/kg组大鼠皮质Ngb蛋白表达显著增加,单位面积内阳性细胞数有统计学意义。海马区:各实验组观察,正常组与模型组未见海马各区有Ngb蛋白的表达。蕨麻醇提物3.6g/kg组海马CA1、CA2区有少量棕黄色颗粒表达。（2）Western blot实验检测Ngb蛋白含量变化:与正常对照组相比,模型组Ngb表达明显上调（P<0.01）,与模型组比较,蕨麻醇提物3.6g/kg Ngb蛋白表达显著增高（P<0.01）。（2）RT-PCR实验检测大鼠脑皮质中Ngb mRNA含量变化:模型组大鼠脑皮质Ngb mRNA明显增高（P<0.01）,蕨麻醇提物3.6g/kg明显高于模型组（P<0.01）。结论:蕨麻醇提物能减轻大鼠低压缺氧所致心、脑、肾脏损伤的程度;减轻脑组织超微结构的病理变化程度;降低大鼠脑水肿;可以有效抑制ET-1的释放,促进CGRP释放,通过维持ET-1和CGRP的动态平衡来拮抗ET-1的血管损害作用;能促进Ngb mRNA及其蛋白的表达,减轻神经元的缺氧性损害;提示蕨麻可能通过增加保护性蛋白Ngb表达,减轻或缓解低压缺氧所致脑损伤。

论文目录

• 中文摘要
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• 研究论文 蕨麻对低压缺氧大鼠的保护作用及脑红蛋白表达的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述一 脑红蛋白的抗缺氧作用的研究进展
• 综述二 急性高原病的研究进展
• 致谢
• 个人简历