导读:本文包含了低亲和性论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:拟南芥(Arabidopsis,thaliana),低亲和性Na~+吸收,~(22)Na~+内流,athkt1
低亲和性论文文献综述
王茜[1]（2014）在《盐胁迫下拟南芥低亲和性Na~+吸收途径及其体内Na~+、K~+稳态平衡的研究》一文中研究指出土壤盐渍化已成为世界范围内限制作物质量和产量的重要环境因子。植物体内积累过量的Na+会扰乱细胞离子稳态平衡、损伤细胞膜并抑制代谢酶活性,从而导致植物生长受到抑制甚至引起死亡。其中由低亲和性吸收系统介导的毒性Na+吸收是造成植物盐害的诱因,因此减少有害Na+进入植物体内是解决这一问题的关键。然而,截至目前为止,关于植物根系低亲和性Na+吸收的途径却仍不清楚。与此同时,毒性Na+和营养性K+在植物体内的分配更是植物耐盐性的关键所在,因此,在了解Na+吸收途径的同时,探讨Na+、K+在植物体内的稳态平衡过程,可为提高植物耐盐性提供重要理论依据。本论文以拟南芥(Arabidopsis thaliana)野生型(WT)、hktl突变体(athkt1;1)及sosl突变体(atsos1)为研究材料,首先运用各类K+通道或转运蛋白抑制剂,对不同Na+、K+处理下,WT和athkt1;1根系22Na+内流、Na+、K+净吸收速率、Na+、K+积累及相关基因的表达模式进行分析,初步探讨了拟南芥根系低亲和性Na+吸收途径；随后,再对不同Na+、K+处理下,WT、athkt;1和atsos1体内Na+、K+积累及分配进行分析,进而对AtHKT1;1和AtSOS1如何协同调节拟南芥体内Na+、K+稳态平衡进行了探讨。取得如下主要结果：1.在正常K+(2.5mM)加盐(25mM NaCl)条件下,10mM Ca2+口5mMBa2+能显着抑制拟南芥野生型(WT)根系22Na+内流及其Na+净吸收速率,但不影响野生型(WT)中K+的净吸收速率；同时,AtHKT1;1受25mM NaCl的短期诱导,其表达量在盐处理3h后急剧上调。由此可见,在正常K+(2.5mM)加盐(25mM NaCl)条件下,NSCC是拟南芥野生型(WT)根系主要的低亲AtHKT1;1和性Na+吸收途径。2.在正常K+(2.5mM)加盐(25mM NaCl)条件下,Ca2+、Ba2+、TEA+和NH4+均能显着抑制拟南芥hktl；1突变体(athkt1;1)根系22Na+内流及其Na+净吸收速率；同时,AtHAK5受25mM NaCl的短期诱导,其表达量在盐处理3h后急剧上调。由此可见,在正常K+(2.5mM)加盐(25mM NaCl)条件下,NSCC和AtHAK5是拟南芥hkt1；1突变体(athkt1;1)根系主要的低亲和性Na+吸收途径。3.低K+(0.01mM)胁迫7d后,拟南芥野生型(WT)和hkt1；1突变体(athkt1;1)的Na+净吸收速率、根及地上部Na+浓度均急剧增加,但其组织含水量却无显着差异。由此可见,K+亏缺条件下,植物会吸收部分Na+代替K+行使保持体内渗透势平衡及细胞膨压等生理过程的功能。4.在低K+(0.0l mM)加盐(25mM NaCl)条件下,尽管各抑制剂对拟南芥野生型(WT) Na+、K+净吸收速率无显着影响,但与正常K+(2.5mM)加盐(25mM NaCl)相比,其Na+净吸收速率由50nmol/g.RFW/min增至近130nmol/g. RFW/min;同时,与正常K+(2.5mM)加盐(25mM NaCl)相比,拟南芥野生型(WT)中,AtHKT1;1的表达水平在低K+(0.01mM)加盐(25mM NaCl)处理下显着下调,而AtHAK5则显着上调。以上结果表明,在低K+(0.01mM)加盐(25mM NaCl)条件下,主要由AtHAK5调节拟南芥野生型(WT)根系低亲和性Na+的吸收。5.在低K+(0.0l mM)加盐(25mM NaCl)条件下,与拟南芥野生型(WT)相似,尽管各抑制剂对拟南芥hktl；1突变体(athkt1;1)Na+、K+净吸收速率无显着影响,但与正常K+(2.5mM)加盐(25mM NaCl)相比,其Na+净吸收速率由50nmol/g. RFW/min曾至100nmol/g. RFW/min;同时,与正常K+(2.5mM)加盐(25mM NaCl)相比,拟南芥hkt1；1突变体(athkt1;1)中,AtHAK5的表达水平显着上调,并随着盐处理时间的延长,其表达量持续增加。以上结果表明,在低K+(0.01mM)加盐(25mM NaCl)条件下,主要时由AtHAK5介导拟南芥hktl,1突变体(athkt1;1)根系低亲和性Na+的吸收。6.正常K+(2.5mM)加轻度盐胁迫(25mM NaCl)下,拟南芥hktl；1突变体(athkt1;1)拥有更高的地上部Na+浓度和更低的根Na+浓度,及更低的地上部K+浓度和更高的根K+浓度,但整体长势与拟南芥野生型(WT)相似；而拟南芥sosl突变体(atsosl)则拥有更高的根Na+浓度和更低的K+净吸收速率,且整体长势显着受抑。由此可见,AtHKT1;1与AtSOS1协同调节正常K+加轻度盐胁迫下拟南芥体内Na+、K+平衡：其中AtHKT1;1主导Na+从木质部中的卸载过程,而AtSOS1主导Na+外排过程,进而共同维持植物体内低Na+浓度。7.正常K+(2.5mM)加重度盐胁迫(100mM NaCl)下,拟南芥hkt1；1突变体(athkt1;1)拥有更高的地上部Na+浓度和更低的根Na+浓度,及更低的K+净吸收速率；而拟南芥SOS1突变体(atsos1)则拥有更高的根及地上部Na+浓度。由此可见,AtHKT1;1与AtSOS1协同调节正常K+加重度盐胁迫下拟南芥体内Na+、K+平衡：其中AtHKT1;1主导Na+从木质部中的卸载过程,而AtSOS1主导Na+外排过程,进而共同维持植物体内低Na+浓度。8.低K+(0.01mM)加轻度盐胁迫(25mMNaCl)下,拟南芥hkt1；1突变体(athkt1;1)与拟南芥野生型(WT)在长势及离子吸收积累方面均无显着差异；而拟南芥sos1突变体(atsos1)则拥有更高的根Na+浓度和更低的地上部Na+浓度,且整体长势显着受抑。由此可见,AtHKT1;1与AtSOS1协同调节低K+加轻度盐胁迫下拟南芥体内Na+、K+平衡：其中AtHKT1;1功能受低K+条件抑制,AtSOS1主导Na+在木质部的装载,进而在K+亏缺环境下,利用Na+代替K+维持植物体的渗透平衡。9.低K+(0.01mM)加重度盐胁迫(100mM NaCl)下,拟南芥hktl；1突变体(athktl;1)拥有更低的Na+净吸收速率；拟南芥sos1突变体(atsos1)则拥有更低的地上部Na+浓度和更低的K+净吸收速率,整体长势同样显着受抑。由此可见,AtHKT1;1与AtSOS1协同调节低K+加重度盐胁迫下拟南芥体内Na+、K+平衡：其中AtHKT1;1主导根系Na+吸收,AtSOS1主导Na+在木质部的装载,进而协同利用Na+代替K+维持植物体的渗透平衡,从而改善低K+高盐对植物造成的双重伤害。综上所述,NSCC、AtHKT1;1和AtHAK5协同调节不同Na+、K+环境下根系对Na+的吸收；同时,AtHKT1;1与AtSOS1构成的调控网络对植物体在各种Na+、K+胁迫下,维持其体内Na+、K+稳态平衡具有重要作用。(本文来源于《兰州大学》期刊2014-10-01）
郑海林[2]（2014）在《低亲和性钙离子通道基因figA在构巢曲霉的生长发育过程中的功能研究》一文中研究指出钙离子介导的信号通路是一条广泛存在于真核生物中,并参与多种生命进程调节的信号通路。在酿酒酵母中,至少存在两条钙离子吸收途径,一个称之为高亲和性钙离子通道(HACS),另一个称之为低亲和性钙离子通道(LACS)。相比高亲和性钙离子通道而言,对低亲和性钙离子通道的了解非常有限。目前为止,Fig1是目前发现的唯一的也是真菌中特有的低亲和性钙离子通道。它在酿酒酵母中受到交配信息素的诱导上调表达,当fig1缺失后会导致菌株间不能成功的发生融合。因此,fig1(受交配因子诱导的基因)的名称由此而来。本课题是在丝状真菌构巢曲霉中对酿酒酵母Fig1的同源蛋白FigA的功能进行的研究。曲霉是自然界中广泛分布的一类真菌,丝状真菌的模式生物—构巢曲霉通过复杂的调控机制既可以进行无性生殖也可以进行有性生殖。我们前期的研究报道在低钙环境下,高亲和性钙离子通道的成员CchA/MidA在调节构巢曲霉的产孢,菌丝极性生长,细胞壁成分上发挥了独特的作用。而与HACS相比,LACS的研究不多。因此,本文通过分析胞内钙离子稳态变化、基因表达和蛋白的荧光定位,研究figA是如何在曲霉生长的各个阶段起作用的,尤其是在菌丝的极性生长和无性、有性生长阶段。为了研究figA的功能,我们分别构建了figA基因敲除菌株和条件表达菌株。结果表明,figA基因缺失后会延缓菌丝的生长和极大的减少菌落的产孢量,而提高figA的表达量,菌株的菌丝生长和产孢量可以得到相应的提高。说明fgA在构巢曲霉的菌丝生长和无性产孢阶段都发挥重要作用。更为重要的是,FigA对于曲霉的同宗配合(自交)是必须的,figA基因敲除后会完全阻断曲霉自交闭囊壳的形成。进一步发现在缺失高亲和性钙离子通道成员cchA/midA时,FigA对于构巢曲霉的异宗配合(杂交)也是必须的。而有意思的是,当外源添加钙时可以恢复figA基因缺失引起的菌丝生长缺陷,却依然不能恢复无性和有性发育(自交和杂交)的缺陷。与此同时,在有性生殖的实验过程中发现,出发菌株中常见的营养缺陷型筛选标记,编码核黄素合成基因riboB2缺失时,构巢曲霉自交时不会形成成熟的闭囊壳,以及完全不能形成杂交的闭囊壳。为了研究核黄素在构巢曲霉的生长过程中扮演的作用,于是对构巢曲霉各个阶段所需的核黄素进行了测试。我们发现构巢曲霉在不同的发育阶段需要的核黄素量不同,其中有性生殖阶段需要的浓度最高,为菌丝生长时期的1000倍。通过外源添加高浓度的核黄素可以有效的恢复riboB2缺失菌的自交和杂交的缺陷。因此我们想检测figA基因缺失菌株的自交和杂交缺陷是否由于出发菌株中riboB2缺失造成的。然而通过实验发现外加高浓度的核黄素依然不能使△figA的有性生殖缺陷恢复正常。说明,figA确实在构巢曲霉的有性发育阶段发挥重要作用。此外,定量PCR实验揭示fgA基因缺失后会导致brlA和nsdD的表达量明显降低,而brlA和nsdD分别是作为公认的无性生殖和有性生殖中心调节者。此外,通过对FigA的碳端进行GFP标记,发现FigA都是定位在成熟菌丝的隔膜上,以及产孢结构的泡囊—梗基、梗基—瓶梗的连接处。综上,我们的研究表明在构巢曲霉中FigA蛋白定位在细胞-细胞连接处,在菌丝生长,无性生殖和有性生殖方面都发挥着重要的作用,可能是通过影响钙离子的吸收,细胞间物质运输,调控相关转录因子的表达来实现的。(本文来源于《南京师范大学》期刊2014-04-01）
陈托兄[3]（2011）在《海滨碱蓬(Suaeda maritima)低亲和性Na~+吸收速率的研究》一文中研究指出用采自英国苏克塞斯的海滨碱蓬为材料,将铺有滤纸的培养皿中发芽7天的海滨碱蓬幼苗,移栽到育苗盘中溶液培养,用调整过的Hoagland营养液培养海滨碱蓬21天,用150mmol/L NaCl处理海滨碱蓬0h、6h、12h、24h、36h及48h,测定海滨碱蓬在不同处理时间下根、茎、叶的鲜重、干重及Na+含量。分析Na+吸收速率在48h内的变化趋势。结果表明,不同处理之间海滨碱蓬Na+吸收速率差异不显着。因此,海滨碱蓬在48h内的Na+吸收速率基本保持不变,在与Na+吸收途径有关的试验中,处理时间设为48h不仅可以节省人力物力财力,又可以取得事半功倍的良好研究目的。(本文来源于《中国农学通报》期刊2011年12期）
赵占虎[4]（2009）在《小麦低亲和性阳离子转运蛋白LCT1的亚细胞定位及功能研究》一文中研究指出盐害、干旱、极端高低温等非生物胁迫严重影响小麦的产量和品质,因此研究阳离子转运蛋白基因LCT1的功能,进一步探讨其参与耐盐性的机理,培育可以耐盐的优良小麦品种,具有十分重要的意义。小麦LCT1是从小麦cDNA表达库中筛选的可互补酵母菌K~+吸收缺陷型G19的低亲和性阳离子转运蛋白基因(Schachtman et al.,1997),本实验室王玉峰等已经获得LCT1基因及剪接变异体LCT1-2,LCT1-2比LCT1少了115bp的序列(可能是内含子),从而导致其mRNA提前产生终止密码,LCT1-2也不能使酵母突变体G19产生超敏表型,本研究通过构建瞬时表达载体将LCT1及LCT1-2基因与GFP基因融合,并转化拟南芥原生质体,荧光定位结果表明LCT1蛋白在细胞质膜和叶绿体中均有分布,而LCT1-2编码的蛋白则降低了膜定位能力,在细胞质中大量积累。为了进一步验证LCT1基因的功能,我们构建了RNA干扰载体,通过转录后水平沉默小麦LCT1,来研究其在小麦生长发育和抵御盐害过程中发挥的作用,目前已经得到转基因小麦T_0代植株,对其及后代正在进行阳性植株的筛选及耐盐性生理、生化分析。胚胎晚期发育丰富蛋白(LEA蛋白)是在种子发育过程中的胚胎发育晚期富集的一类蛋白,而且在水分亏缺、盐胁迫、低温、ABA处理时均可产生,HVA1转化植物可以提高其对水分胁迫的耐受性。本实验室构建了无选择标记由干旱诱导启动子RD29A驱动的HVA1基因植物表达载体,通过农杆菌介导的苗端转化法将其导入普通小麦烟2801,并已经遗传到T_2代,通过对所得的T_2代植株在干旱胁迫下的表型和生理指标分析表明:其对干旱胁迫表现出比野生型更高的敏感性。由于RT-PCR也未发现该基因的表达,推测可能是发生了转基因沉默,对其在小麦中的部分同源基因的RT-PCR检测也未发现明显的抑制效应。这为今后进一步搞清楚这种基因沉默的原因,提高大麦HVA1的表达、探讨有效避免的方法提供了很好的材料,也必然会进一步促进小麦耐旱的转基因育种研究。(本文来源于《山东大学》期刊2009-05-26）
黄豫晓,李英辉,赵亚,韩荣霞,刘忠湘[5]（2009）在《HIV-1 pol抗原HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位预测及改造分析》一文中研究指出目的:初步筛选HIV-1pol抗原的HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,预测并初步鉴定修饰后的表位与HLA-A*0201之间亲和性的变化。方法:采用超基序、蛋白酶解、HLA结合力等预测相结合的办法筛选HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,通过氨基酸置换适当修饰,并以T2细胞检测HLA-A*0201分子与肽的亲和力和稳定性来评价修饰后表位。结果:筛选出的低亲和性CTL候选表位,经修饰后与HLA-A*0201之间的亲和性均有不同程度的提高。其中,YVSLSFPQI(pol52-60Y1),YVSQIIEQL(pol673-681Y1),YIQKETWEA(pol548-556Y1)HLA-A*0201呈高亲和力结合,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(Dissociation Complex50,DC50)均大于8h。结论:预测的pol抗原表位经过修饰可能会成为潜在的HLA-A*0201限制性表位。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2009年04期）
王真[6]（2008）在《小麦低亲和性阳离子转运蛋白基因LCT1的定位、表达及功能研究》一文中研究指出土壤盐渍化和次生盐渍化是世界范围内日益严重的问题,可引起多种作物的减产,是制约农业发展的主要瓶颈之一。盐渍化土壤中主要含有较高浓度的氯化钠,其水解电离产生的Na~+对作物的生长有强烈的抑制作用。研究Na~+相关的转运蛋白对植物抗盐有非常重要的意义。小麦是世界上重要的粮食作物之一,也是我国主要的粮食作物,提高小麦的耐盐性,培育耐盐小麦新品种对保证我国的粮食生产,可持续稳产、高产有着深远的意义。Schachtman等人利用K~吸收缺陷型酵母进行功能互补实验,从小麦根cDNA文库中筛选到与Na~+吸收有关的离子转运蛋白基因HKT1(high-affinity K~+transporter)和LCT1(low-affinity cation transpoter)。目前对HKT1的研究较多,对LCT1的报道较少。LCT1的二级结构显示,其包含9个跨膜区域以及2个富含Pro、Ser、Thr及Glu序列的亲水氨基酸末端PEST序列。LCT1主要在小麦根部和叶片表达。LCT1的异源表达结果表明:可跨膜转运多种阳离子,有一定的非选择性。例如不仅能转运K~+,而且还能转运Na~+、Rb~+、Cd~(2+)和Ca~(2+),对Na~+和Rb~+为低亲和吸收。LCT1基因有可能是小麦Na~+吸收的重要途径之一,研究LCT1基因的表达模式和功能,对实现小麦和其它作物的抗盐具有重要的意义。本研究对LCT1基因进行了染色体定位,以中国春小麦缺体四体系和双端体系的基因组DNA为模板,采用LCT1基因的特异引物进行PCR扩增,最终确定LCT1基因定位在中国春小麦的1B染色体的长臂上。为了研究LCT1基因的功能和表达,我们根据本实验室已经得到的LCT1基因组序列,利用热不对称交错PCR(Thermal Asymmetric Interlaced PCR,简称TAIL-PCR)的方法克隆小麦LCT1基因的启动子,目前虽然仅得到263bp的核心序列,但分析发现含有启动子的重要元件,如TATA box,MBS,HSE,G-box等。从本实验室已经克隆的中国春小麦LCT1全长cDNA pool中,发现了一种缺少115bp(可能为其内含子)的LCT1剪接变异体序列(命名为LCT1-2)。为了研究LCT1基因的这两种cDNA序列在功能上的差异,分别构建了酵母表达载体和植物表达载体,我们将其转化酵母Na~+-extruding ATPase突变体G19(由于编码质膜Na~+-extruding ATPase的基因ENA1-ENA4被破坏,因而G19对Na~+的敏感性提高)和拟南芥。酵母表达实验结果表明,在含NaCl的培养基上,表达LCT1基因的酵母菌长势明显弱于转空载体的对照菌株G19,表现出对Na~+的超敏感性;而表达LCT1-2序列的酵母菌长势很好,并还略好于转空载体的对照菌株,没有体现出对Na~+的超敏感性。说明LCT1基因有转运Na~+进入细胞的能力,而LCT1-2序列则无此功能。应用农杆菌介导的花器官侵染法将两种cDNA序列转化至哥伦比亚型拟南芥中,已经筛选出T_1代转基因后代,为今后的生理生化实验奠定了基础。(本文来源于《山东大学》期刊2008-05-10）
李英辉,赵亚,刘忠湘,毛张翔,黄豫晓[7]（2008）在《HIV-1 Gag抗原HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位预测及改造分析》一文中研究指出初步筛选HIV-1 Gag抗原的HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,预测并初步鉴定修饰后的表位与HLA-A*0201之间亲和性的变化。采用超基序、蛋白酶解预测等相结合的办法筛选HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,通过氨基酸置换适当修饰,并以T2细胞株测定肽与HLA-A*0201分子的亲和力和稳定性试验来评价修饰后表位与HLA-A*0201之间亲和性。结果:筛选出3个低亲和性CTL候选表位,经修饰后的表位与HLA-A*0201之间的亲和性均有不同程度的提高。YIYKRWIIL(259-267Y1),YQANFLGKI(429-437Y1)和YTNNPPIPV(249-257Y1)与HLA-A*0201呈高亲和力结合,荧光系数(flurorescene index,FI)分别为2.68、2.54和2.35,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(dissociation complex50,DC50)均大于8h。预测的低亲和力表位经过修饰可能会成为潜在的HLA-A*0201限制性表位。(本文来源于《现代免疫学》期刊2008年01期）
王玉锋[8]（2006）在《小麦全长cDNA pool的制备和低亲和性离子转运蛋白LCT1基因及剪接变异体的克隆及在烟草中的表达》一文中研究指出小麦是世界重要的粮食作物之一。cDNA文库是小麦功能基因组研究的重要组成部分，小麦的全长cDNA文库的构建可以为小麦基因组计划的研究提供重要的技术支撑，是小麦物理图谱的绘制、基因识别、结构及功能研究、表达及定位的重要依据之一。而全长cDNA池(full-length cDNA pool)则是cDNA文库构建的最重要环节。 我们采用改进的GeneRacer技术获得了全长cDNA池，其原理是基于效率较高的oligo-caping方法。制备好的全长cDNA池，和特定克隆载体DNA连接，转化宿主菌，随机挑取阳性克隆进行测序分析，所得序列的全长性也证实了该方法的可靠性。经检验该全长cDNA池的质量较高，可用于构建全长cDNA文库。 Daniel等人通过基因功能互补法从小麦根组织中分离的LCT1基因，可编码包含574个氨基酸的低亲和性离子通道蛋白。其二级结构分析显示：该蛋白包含8到10个跨膜螺旋和1个富含Pro、Ser、Thr和Glu的(PEST序列)亲水性氨基酸端。通过在k~+吸收缺陷型酵母G19中表达LCT1 cDNA发现LCT1表达的蛋白是渗透型广范围离子通道，它能低亲和性调节Li~+、Na~+、K~+、Rb~+、Ca~(2+)等离子的单向吸收，离子吸收率与离子浓度成线性关系。高浓度K~+、Cs~+、Ca~(2+)的竞争性的抑制可降低对Na~+的吸收，从而改善Na~+引起的毒性，挽救盐培养基上酵母的生长。 在特定酵母中过量表达LCT1基因时可导致Na~+、K~+等多种离子通透性的增强，而对它在植物中的研究却较少。为了研究植物在盐胁迫对下LCT1基因的作用，寻找小麦抗盐育种的新途径，我们从全长cDNA pool中钓取该基因，并发现了一种缺少115bp片断的LCT1 cDNA克隆，通过从小麦基因组中克隆其基因组序列，叁者比较分析发现，缺少115bp片断的LCT1 cDNA为组成性剪接的产物(因为来源于2号克隆菌，命名为LCT1-2)，已报道的LCT1 cDNA则是第四个内含子保留的选择性剪接产物。 将这两个cDNA序列分别构建到植物表达载体中并转化烟草，结果表明转LCT1基因的烟草在正常培养基1／2MS中生长缓慢，且不生根。它与转LCT1-2基因的烟草在可溶性糖、可溶性蛋白及脯氨酸含量上比对照K326明显偏高，可(本文来源于《山东大学》期刊2006-05-18）
殷勤,刘爱国,盛磊[9]（2005）在《冷凝集素伴低亲和性抗-B抗体致ABO血型鉴定错误1例报道》一文中研究指出ABO血型鉴定是患者输血前必须进行的检测项目,其结果的准确与否,直接关系到患者的生命安全。导致ABO血型鉴定发生错误的原因很多,其中冷凝集素(CA)效价过高是最常见的原因。现将本站遇到1例高效价CA伴低亲和抗-B抗体的病例报告如下。(本文来源于《农垦医学》期刊2005年03期）
阮志华,吴玉章,支轶,王惠明,唐艳[10]（2005）在《肿瘤血管内皮抗原TEM8的HLA-2.1限制性低亲和性CTL表位预测及改造分析》一文中研究指出目的 初步筛选肿瘤血管内皮标志物8(tumorendothelialmarker 8,TEM 8)HLA A2 1限制性低亲和性CTL表位,并预测修饰后的表位与HLA A2 1之间亲和性的变化。方法 采用超基序、3D QSAR、蛋白酶解预测等相结合的办法筛选HLA A2 1限制性低亲和性CTL表位,并通过氨基酸置换适当修饰,最后对部分候选的多肽进行分子动力学模拟。结果 筛选出8个低亲和性CTL候选表位,经修饰后的表位与HLA A2 1之间的亲和性均有不同程度的提高。结论 初步预测和修饰的表位系列可为下一步实验提供了依据。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2005年11期）
低亲和性论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
钙离子介导的信号通路是一条广泛存在于真核生物中,并参与多种生命进程调节的信号通路。在酿酒酵母中,至少存在两条钙离子吸收途径,一个称之为高亲和性钙离子通道(HACS),另一个称之为低亲和性钙离子通道(LACS)。相比高亲和性钙离子通道而言,对低亲和性钙离子通道的了解非常有限。目前为止,Fig1是目前发现的唯一的也是真菌中特有的低亲和性钙离子通道。它在酿酒酵母中受到交配信息素的诱导上调表达,当fig1缺失后会导致菌株间不能成功的发生融合。因此,fig1(受交配因子诱导的基因)的名称由此而来。本课题是在丝状真菌构巢曲霉中对酿酒酵母Fig1的同源蛋白FigA的功能进行的研究。曲霉是自然界中广泛分布的一类真菌,丝状真菌的模式生物—构巢曲霉通过复杂的调控机制既可以进行无性生殖也可以进行有性生殖。我们前期的研究报道在低钙环境下,高亲和性钙离子通道的成员CchA/MidA在调节构巢曲霉的产孢,菌丝极性生长,细胞壁成分上发挥了独特的作用。而与HACS相比,LACS的研究不多。因此,本文通过分析胞内钙离子稳态变化、基因表达和蛋白的荧光定位,研究figA是如何在曲霉生长的各个阶段起作用的,尤其是在菌丝的极性生长和无性、有性生长阶段。为了研究figA的功能,我们分别构建了figA基因敲除菌株和条件表达菌株。结果表明,figA基因缺失后会延缓菌丝的生长和极大的减少菌落的产孢量,而提高figA的表达量,菌株的菌丝生长和产孢量可以得到相应的提高。说明fgA在构巢曲霉的菌丝生长和无性产孢阶段都发挥重要作用。更为重要的是,FigA对于曲霉的同宗配合(自交)是必须的,figA基因敲除后会完全阻断曲霉自交闭囊壳的形成。进一步发现在缺失高亲和性钙离子通道成员cchA/midA时,FigA对于构巢曲霉的异宗配合(杂交)也是必须的。而有意思的是,当外源添加钙时可以恢复figA基因缺失引起的菌丝生长缺陷,却依然不能恢复无性和有性发育(自交和杂交)的缺陷。与此同时,在有性生殖的实验过程中发现,出发菌株中常见的营养缺陷型筛选标记,编码核黄素合成基因riboB2缺失时,构巢曲霉自交时不会形成成熟的闭囊壳,以及完全不能形成杂交的闭囊壳。为了研究核黄素在构巢曲霉的生长过程中扮演的作用,于是对构巢曲霉各个阶段所需的核黄素进行了测试。我们发现构巢曲霉在不同的发育阶段需要的核黄素量不同,其中有性生殖阶段需要的浓度最高,为菌丝生长时期的1000倍。通过外源添加高浓度的核黄素可以有效的恢复riboB2缺失菌的自交和杂交的缺陷。因此我们想检测figA基因缺失菌株的自交和杂交缺陷是否由于出发菌株中riboB2缺失造成的。然而通过实验发现外加高浓度的核黄素依然不能使△figA的有性生殖缺陷恢复正常。说明,figA确实在构巢曲霉的有性发育阶段发挥重要作用。此外,定量PCR实验揭示fgA基因缺失后会导致brlA和nsdD的表达量明显降低,而brlA和nsdD分别是作为公认的无性生殖和有性生殖中心调节者。此外,通过对FigA的碳端进行GFP标记,发现FigA都是定位在成熟菌丝的隔膜上,以及产孢结构的泡囊—梗基、梗基—瓶梗的连接处。综上,我们的研究表明在构巢曲霉中FigA蛋白定位在细胞-细胞连接处,在菌丝生长,无性生殖和有性生殖方面都发挥着重要的作用,可能是通过影响钙离子的吸收,细胞间物质运输,调控相关转录因子的表达来实现的。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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标签：拟南芥(Arabidopsis; thaliana); 低亲和性Na~+吸收; ~(22)Na~+内流; athkt1;