熟地黄多糖提取纯化工艺研究及其结构组成的初探

论文摘要

熟地黄多糖是“药食同源”熟地黄中特有的活性成分之一,药理研究表明,熟地黄多糖有增强免疫、抗肿瘤、补血等生理功能。研究熟地黄多糖的提取、纯化工艺及其结构性质,对熟地黄资源的深加工和熟地黄多糖食品、保健品的开发有重要意义。本文在研究加热法提取熟地黄多糖的基础上,将超声技术引入熟地黄多糖的提取,用响应面设计法寻找超声提取的最佳工艺;并利用SephadexG-200葡聚糖凝胶与DEAE-Sepharose柱层析纯化熟地黄多糖,在结构分析中,采用了紫外光谱,红外光谱和薄层色谱。熟地黄多糖加热提取实验表明,加热提取熟地黄多糖的最佳条件:颗粒粒度40目、浸体温度90℃、料液比1:70、浸提时间3h、此时熟地黄多糖的提取率为6.679%。以颗粒粒度40目熟地黄为原料超声提取熟地黄多糖能显著提高生产效率并简化提取工艺,其最佳条件为:料液比1:56,提取温度64.5℃,提取时间3.1min,熟地黄多糖的提取率为6.801%。得出回归方程:y=6.6463+0.304x1+0.1415x2+0.212x3-0.061x1x2-0.2872x1x3-0.0815x2x3-0.2527x12+0.0665x22-0.2727x32熟地黄多糖分离纯化实验表明:熟地黄多糖提取液浓缩后用sevage法除蛋白,再用蒸馏水透析,经醇沉后的熟地黄多糖,冻干后备用。SephadexG-200葡聚糖凝胶纯化的的熟地黄多糖只有1个洗脱蜂,经DEAE-Sepharose纯化的熟地黄多糖呈现2个洗脱蜂,说明DEAE-Sepharose比SephadexG-200葡聚糖凝胶具有高的分辨率。在纯化过程中SephadexG-200葡聚糖凝胶几乎对色素无吸附作用,而DEAE-Sepharose对色素具有很强的吸附作用,因此,本实验选择DEAE-Sepharose纯化熟地黄多糖。熟地黄多糖的单糖分析:采用薄层色谱分析法对熟地多糖的单糖组成进行了分析。将熟地黄多糖完全酸解后,采用硅胶薄层板,以正丁醇:乙酸:水（9:4:2）为展开剂,10%硫酸-乙醇溶液为显色剂。分析结果表明:熟地黄多糖主要由葡萄糖、半乳糖、果糖和水苏糖等单糖组成。

论文目录

• 符号说明
• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 熟地黄及熟地黄多糖的研究进展
• 1.1.1 熟地黄的化学成分概述
• 1.1.2 熟地黄的药理研究
• 1.1.3 熟地黄多糖研究进展
• 1.2 多糖的化学结构研究概述
• 1.2.1 提取分离与除杂
• 1.2.2 分离纯化
• 1.2.3 纯度的测定
• 1.2.4 多糖的结构分析
• 1.3 超声波强化提取的原理
• 1.4 关于响应面设计
• 1.5 本研究的目的和意义
• 1.6 本研究的内容
• 2 材料与方法
• 2.1 主要试剂
• 2.2 主要仪器与设备
• 2.3 技术路线
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 熟地黄多糖的检测方法
• 2.4.2 传统热水法提取熟地黄多糖的工艺
• 2.4.3 超声法提取熟地黄多糖的工艺
• 2.4.4 熟地黄多糖样品的初步纯化
• 2.4.5 葡聚糖凝胶SephadexG-200 柱层析
• 2.4.6 DEAE-Sepharose Fast Flow 柱层析
• 2.4.7 纯度的鉴定
• 2.4.8 熟地黄多糖结构初步分析
• 2.4.9 薄层色谱分析
• 3 结果与分析
• 3.1 熟地黄多糖含量的测定方法的确立
• 3.1.1 工作曲线回归方程的建立
• 3.1.2 熟地黄多糖的校正因子的确定
• 3.1.3 测定多糖含量的方法学考察
• 3.2 加热提取熟地黄多糖的工艺研究
• 3.2.1 加热提取熟地黄多糖单因素实验
• 3.2.2 加热提取熟地黄多糖的正交实验设计
• 3.3 超生波提取熟地黄多糖的工艺研究
• 3.3.1 超声波提取熟地黄多糖单因素实验
• 3.3.2 响应面分析法优化超声波提取熟地黄多糖的工艺
• 3.4 熟地黄多糖精制纯化实验结果
• 3.5 熟地黄多糖物化性质及结构组成的初探
• 3.5.1 熟地黄多糖的性状及溶解实验
• 3.5.2 熟地黄多糖的定性鉴别实验
• 3.5.3 熟地黄多糖纯度鉴定的实验结果
• 3.5.4 熟地黄多糖的结构分析的实验结果
• 3.5.5 熟地黄多糖中单糖组分的鉴定
• 4 讨论
• 4.1 熟地黄多糖的提取
• 4.2 熟地黄多糖的分离除杂
• 4.3 熟地黄多糖的纯化
• 4.4 进一步研究方向
• 5 结论与创新点
• 5.1 结论
• 5.2 创新点
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表论文情况