鸡肠道乳酸菌分离鉴定及其功能研究

论文摘要

随着养殖业的不断发展,微生态制剂的应用越来越广泛,对畜牧业的健康、可持续发展发挥了重要作用。本研究利用分离自鸡消化道的乳酸菌制成微生态制剂,对肉鸡进行了饲喂试验,通过增重、免疫器官指数及盲肠中微生物数量的变化检测,显示了鸡源乳酸菌微生态制剂对肉鸡的生产性能、免疫功能等均具有明显的增强作用。该研究结果为利用鸡源乳酸菌开发家禽用微生态制剂提供了理论依据和菌种保证。本研究分三部分内容一、鸡消化道乳酸菌的分离与鉴定本实验从健康肉鸡的消化道黏膜部位分离到4株（分别标记为SL-1、SL-2、SL-3、SL-4）产酸的菌株,通过染色镜检、生化实验及16S rRNA分析、鉴定,均属于乳酸菌属,4株菌分别为嗜酸乳杆菌（L.acidophilus）、卷曲乳杆菌（L.crispatus）、鼠李糖乳杆菌（L.rhamnosus）和唾液乳杆菌（L.salivarius）。二、益生乳酸菌的筛选及微生态制剂的制备采用耐胆盐、耐酸试验,对分离的4株乳酸菌进行了筛选,结果表明,SL-3株在0.3%浓度胆盐培养基中可生长,培养48h后细菌数达3.47×109CFU/ml,在pH2.0环境下也能生长,培养2h后细菌数达1.38×103CFU/ml;利用SL-3株菌的培养上清液,通过双层平板法,对致病性大肠杆菌进行了抑菌试验,结果显示,该菌株可有效抑制大肠杆菌的生长,抑菌圈直径达21.2mm。采用常规厌氧培养方法,以SL-3分离株作为菌种制备成功了乳酸菌微生态制剂,经安全试验、储藏试验和细菌计数,该制剂达到质量标准,为开发利用乳酸菌微生态制剂应用于养禽业提供了保证。三、乳酸菌微生态制剂的饲喂效果研究利用分离的SL-3株菌制备的乳酸菌微生态制剂对肉鸡进行了饲喂试验,通过检测鸡增重、料重比、免疫器官指数、抗体效价以及盲肠内容物的乳酸菌数量,探索SL-3株鸡源乳酸菌制剂和猪源CL-11株乳酸菌制剂对鸡生产性能及免疫功能等的影响。结果表明,35日龄时,0.3%浓度SL-3的微生态制剂组鸡增重较对照组和抗生素组分别提高了11.09%和7.18%（差异均显著P<0.05）;相同浓度的猪源乳酸菌制剂较对照组和抗生素组分别提高了4.08%和0.42%;0.3%浓度组鸡的脾、法氏囊、胸腺器官指数较对照组分别增加了67.14%、16.47%和38.16%,较抗生素组分别提高了56%、22.02%和30.81%,相同浓度的猪源乳酸菌制剂较对照组和抗生素组分别提高了31.42%、6.82%、9.76%和22.66%、11.90%、3.92%;0.3%浓度鸡的抗体较对照组和抗生素组分别提高了2log2和1.75log2,差异均显著（P<0.05）;饲喂0.3%浓度微生态制剂组鸡盲肠中的正常菌（乳酸菌）数量较对照组和抗生素组分别升高了1.86CFU/ml和3.09CFU/ml,而肠杆菌数量较对照组和抗生素组降低了7.24CFU/ml和2.45CFU/ml;相同浓度的猪源乳酸菌制剂较对照组和抗生素组分别提高了正常菌（乳酸菌）1.02CFU/ml和1.69CFU/ml。其他日龄段饲喂SL-3株微生态制剂组鸡也均具有促生长作用、增强免疫功能和调整肠道微生态平衡的作用。该试验结果表明,SL-3株乳酸菌制剂能够促进鸡体的免疫功能,也能促进鸡消化道的微生态平衡,但鸡源SL-3乳酸菌微生态制剂均比猪源乳酸菌制剂作用效果明显。该研究结果为开发利用SL-3株乳酸菌制剂提供了理论依据。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 引言
• 1.1 抗生素饲料添加剂的利与弊
• 1.1.1 抗生素及作为添加剂的利用情况
• 1.1.2 抗生素的主要作用机理
• 1.1.3 滥用抗生素带来的危害
• 1.1.4 对抗生素的新认识及采取的措施
• 1.2 动物机体的微生态系统
• 1.2.1 微生态系统及正常菌群
• 1.2.2 正常菌群的作用
• 1.2.3 正常菌群与疾病的关系
• 1.3 鸡肠道正常正常菌群及其生理作用
• 1.3.1 鸡肠道正常菌群的分布
• 1.3.2 鸡肠道菌群的主要生理作用
• 1.3.3 鸡肠道菌群失调的原因及危害
• 1.4 微生态制剂的发展现状
• 1.4.1 微生态制剂的概念
• 1.4.2 微生态制剂的类型
• 1.4.3 微生态制剂的菌种筛选原则及菌种
• 1.4.4 微生态制剂的作用机理
• 1.4.5 微生态制剂的作用
• 1.4.6 微生态制剂的应用范围
• 1.4.7 微生态制剂的应用原则
• 1.4.8 微生态制剂发展的必要性
• 1.4.9 微生态制剂的发展前景极其发展中的注意事项
• 1.5 乳酸菌微生态制剂的发展现状
• 1.5.1 乳酸菌及其组成
• 1.5.2 乳酸菌的生物学特点
• 1.5.3 乳酸菌的作用机制
• 1.5.4 乳酸菌的应用效果
• 1.5.5 乳酸菌的应用前景
• 1.6 本研究的目的及意义
• 2 材料与方法
• 2.1 鸡消化道乳酸菌的分离及鉴定的材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.1.1 菌种
• 2.1.1.2 试验动物
• 2.1.1.3 MRS 培养基
• 2.1.1.4 主要仪器和设备
• 2.1.1.5 实验用气体及染色液
• 2.1.1.6 生化试剂及培养基
• 2.1.1.7 酶、试剂盒及相应试剂
• 2.1.1.8 培养基、缓冲液及常用试剂的配制
• 2.1.2 方法
• 2.1.2.1 乳酸菌的分离
• 2.1.2.2 分离菌染色特性及形态观察
• 2.1.2.3 分离菌的生化鉴定
• 2.1.2.4 16S rDNA 分析
• 2.2 乳酸菌益生效果筛选及微生态制剂的制备
• 2.2.1 材料
• 2.2.1.1 菌种
• 2.2.1.2 培养基和试剂
• 2.2.1.3 实验动物
• 2.2.2 方法
• 2.2.2.1 耐胆盐试验
• 2.2.2.2 耐酸试验
• 2.2.2.3 乳酸菌的体外抑菌试验
• 2.2.2.4 微生态制剂的制备及检测
• 2.2.2.5 数据处理
• 2.3 乳酸菌微生态制剂对肉鸡生产性能及免疫功能的影响
• 2.3.1 材料
• 2.3.1.1 试验动物
• 2.3.1.2 饲料
• 2.3.1.3 选择性培养基
• 2.3.1.4 微生态制剂
• 2.3.1.5 新城疫疫苗及鸡新城疫血凝抑制试验抗原
• 2.3.1.6 抗生素
• 2.3.2 方法
• 2.3.2.1 试验动物分组及免疫
• 2.3.2.2 微生态制剂对鸡增重的影响
• 2.3.2.3 微生态制剂对鸡免疫器官的影响
• 2.3.2.4 微生态制剂对 NDV 血凝抑制抗体效价的影响
• 2.3.2.5 微生态制剂对盲肠内乳酸菌及肠杆菌数量的影响
• 2.3.2.6 数据处理
• 3 结果与分析
• 3.1 鸡消化道乳酸菌的分离及鉴定
• 3.1.1 细菌的分离及染色形态特性
• 3.1.2 分离菌株的鉴定结果
• 3.1.2.1 生化试验
• 3.1.2.2 分离菌的16S rRNA 鉴定
• 3.1.2.3 PCR 产物测序结果
• 3.2 乳酸菌益生效果筛选及微生态制剂的制备
• 3.2.1 益生特性试验结果
• 3.2.1.1 耐胆盐试验结果
• 3.2.1.2 耐酸试验结果
• 3.2.1.3 双层平板体外抑菌试验结果
• 3.2.2 微生态制剂制备及质量检测
• 3.2.2.1 微生态制剂的安全性检测
• 3.2.2.2 微生态制剂的储存效果试验
• 3.3 乳酸菌微生态制剂对肉鸡生产性能及免疫功能的影响
• 3.3.1 微生态制剂对鸡生长性能影响的结果
• 3.3.2 微生态制剂对鸡免疫器官影响的结果
• 3.3.3 微生态制剂对体液免疫影响的结果
• 3.3.4 微生态制剂对盲肠内乳酸菌和肠杆菌数量影响的结果
• 4 讨论
• 4.1 鸡消化道乳酸菌的分离及鉴定
• 4.2 乳酸菌益生效果筛选及微生态制剂的制备
• 4.3 乳酸菌微生态制剂对鸡生产性能及免疫功能的影响
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表论文