论文摘要
目的通过采用复方甲亢片对甲亢合并肝损害大鼠模型进行研究观察,深入探讨复方甲亢片对甲亢合并肝损害治疗作用及保护机理,进一步提高临床对甲亢合并肝损害机理认识,为临床安全用药提供依据。方法通过选用健康Wistar大鼠98只,体重约120±15g,雌雄各半,将98大鼠适应性饲养1周后,随机分出20只作为空白对照组。空白对照组每天上午给以2ml蒸馏水喂服。造模组先随机分出20只作轻度甲亢造模（以浓度为50μg/ml的左旋甲状腺素钠片2ml混悬液灌胃,即低量造模组）,其余58只按重度甲亢造模（以浓度为100μg/ml的左旋甲状腺素钠片2ml混悬液灌胃,即高量造模）。轻度甲亢、重度甲亢每日上午分别相应浓度的左旋甲状腺素钠片2ml混悬液灌胃,每天一次,连续28天。第29天,先分别从空白对照组、低量造模组、高量造模组各组随机取10只大鼠进行（即第四周）FT3、FT4、TSH及ALT、AST、r-GT、ALP、TP、ALB、GLB、TBil、DBil、IBil指标检测。再将48只重度甲亢大鼠随机分为四组,即高量造模组、甲巯咪唑组、单纯中药组、复方甲亢片组,每组12只。自造模第29天开始,空白对照组仍继续每天上午给以2ml蒸馏水喂服,低量造模组仍以浓度为50μg/ml的左旋甲状腺素钠片2ml混悬液灌胃,高量造模组及用药组仍以浓度为100μg/ml的左旋甲状腺素钠片2ml混悬液灌胃,每日上午一次。此外,下午加灌一次,即空白对照组、低量造模组、高量造模组每日灌2ml蒸馏水,甲巯咪唑组灌服甲巯咪唑液2ml,单纯中药组灌服纯中药液2ml,复方甲亢片组灌服复方甲亢片混悬液2ml,连续32天。实验结束后,留取相应标本。用放免法测定血清FT3、FT4、TSH含量;用全自动生化仪检测ALT、AST、r-GT、ALP、TP、ALB、GLB、TBil、DBil、IBil;MDA含量采用硫代巴妥酸荧光法,SOD活性采用黄嘌呤氧化酶法,GSH-Px活性采用二硫双硝基苯甲酸直接法,以定磷法测定Na+-K+-ATP酶活性;以光镜、电镜观察肝脏结构;以免疫组化方法（SP法）检测FasL、Fas、TNF-α细胞因子;以逆转录-多聚酶链反应法（RT-PCR）检测肝核受体T3Rα1、T3Rβ1基因表达。结果1、体重情况,各组均明显增加,但模型组增幅小。具体变化:第四周,空白对照组、低量造模组、高量造模组间均有显著性差异（P＜0.05）,高量造模组与空白对照组有极显著性差异（P＜0.01）。第八周,空白对照组、低量造模组、高量造模组间均有显著性差异（P＜0.05）,高量造模组与空白对照组有极显著性差异（P＜0.01）;治疗组大鼠体重增加,与高量造模组有显著性差异（P＜0.05）,复方甲亢片组、甲巯咪唑组优于单纯中药组。2、饮食量、排泄量。各组均明显增加,但空白对照组增幅小。具体变化:第四周,模型组明显增加,与空白对照组有显著性差异（P＜0.05）;高量造模组与低量造模组无显著性差异（P＞0.05）。第八周,低量造模组饮食量、排泄量最大。空白对照组、低量造模组、高量造模组间均有显著性差异（P＜0.05）,高量造模组与低量造模组有极显著性差异（P＜0.01）;各治疗组饮食量、排泄量减少,与高量造模组有显著性差异（P＜0.05）,复方甲亢片组、单纯中药组优于甲巯咪唑组。3、甲状腺功能FT3、FT4、TSH指标变化:第四周,FT3、FT4升高、TSH降低,空白对照组、低量造模组、高量造模组间均有显著性差异（P＜0.05）,高量造模组与空白对照组有极显著性差异（P＜0.01）。第八周纵向对比（与第四周各组自行对比）,低量造模组FT3、FT4继续升高、TSH继续降低,有显著性差异（P＜0.05）;空白对照组、高量造模组,无显著性差异（P＞0.05）。第八周横向对比（各组间对比）,模型组FT3、FT4升高、TSH降低,空白对照组、低量造模组、高量造模组间均有显著性差异（P＜0.05）,高量造模组与空白对照组有极显著性差异（P＜0.01）。治疗后治疗组FT3、FT4降低、TSH升高,各治疗组与高量造模组,有显著性差异（P＜0.05）,治疗作用有甲巯咪唑组＞复方甲亢片组＞单纯中药组。4、肝功能指标。GLB、TBil、DBil、IBil各组无显著性差异（P＞0.05）。ALT、AST、r-GT、ALP,TP、ALB具体变化:第四周,模型组ALT、AST、r-GT、ALP升高,TP、ALB降低,模型组与正常组有显著差异（P＜0.05）,低量造模组与高量造模组无显著性差异（P＞0.05）。第八周纵向对比（与第四周各组自行对比）,模型组ALT、AST、r-GT、ALP升高,有显著性差异（P＜0.05）,TP、ALB降低仅在高量组中有显著性差异（P＜0.05）。第八周横向对比（各组间对比）,模型组ALT、AST、r-GT、ALP升高,空白对照组、低量造模组、高量造模组间均有显著性差异（P＜0.05）,高量造模组与空白对照组有极显著性差异（P＜0.01）。TP、ALB降低仅在高量组中有显著性差异（P＜0.05）;治疗后治疗组ALT、AST、r-GT、ALP降低,各治疗组与高量造模组,有显著性差异（P＜0.05）,治疗作用有复方甲亢片组＞单纯中药组＞甲巯咪唑组。治疗后治疗组TP、ALB升高,治疗作用复方甲亢片组优于单纯中药组、甲巯咪唑组。5、肝组织病理切片光镜下观察。空白对照组,肝细胞形态正常。低量造模组,主要见肝细胞轻度水肿,胞质稀疏淡染,肝小叶中央静脉及肝窦充血扩张,小叶中央呈点状坏死,汇管区伴炎性细胞浸润。高量造模组,除见低量造模组改变外,肝细胞明显肿胀或见脂肪变性,肝细胞条索紊乱,小叶中央可见散在点状坏死。甲巯咪唑组,主要改善肝细胞肿胀减轻,小叶间胆管扩张淤胆。单纯中药组,肝细胞肿胀减轻,肝窦及中央静脉充血扩张减轻。复方甲亢片组,肝细胞肿胀明显减轻,肝窦及中央静脉充血扩张明显减轻,可见双核细胞增多。6、肝组织病理切片电镜下观察。空白对照组,肝细胞超微结构正常。低量造模组,可见糖原颗粒减少,粗面内质网丰富扩张,线粒体增多、嵴断裂、外形各异,或见肝窦、毛细胆管扩张、微绒毛减少。高造模组,除见低量造模组改变外,线粒体增多、增大、形态各异、嵴紊乱或消失,或见脂滴空泡,或染色质浓缩、细胞坏死。甲巯咪唑组,可见糖原颗粒明显增多或过度增多,线粒体减少、肿大,或见毛细胆管扩张淤胆,或见细胞坏死。单纯中药组,可见糖原颗粒增多,线粒体减少、肿胀减轻,肝窦、毛细胆管扩张减轻。复方甲亢片组,可见糖原颗粒增多,线粒体减少、体积减小、嵴排列规则,内质网增生明显。7、肝组织Na+-K+-ATP、GSH-Px、SOD活性,MDA含量。具体有:Na+-K+-ATP活性,低量造模组升高、高量造模组降低;空白对照组、低量造模组、高量造模组间均有显著性差异（P＜0.05）;低量造模组与空白对照组有极显著性差异（P＜0.01）。各治疗组Na+-K+-ATP升高,与高量造模组,有显著性差异（P＜0.05）,治疗作用有复方甲亢片组＞单纯中药组＞甲巯咪唑组。GSH-Px、SOD活性,模型组降低。空白对照组、低量造模组、高量造模组间均有显著性差异（P＜0.05）,空白对照组与高量造模组有极显著性差异（P＜0.01）;各治疗组GSH-Px、SOD活性升高,与高量造模组,有显著性差异（P＜0.05）,且复方甲亢片组与高量造模组有极显著性差异（P＜0.01）。治疗作用有复方甲亢片组＞单纯中药组＞甲巯咪唑组。MDA含量,模型组升高。空白对照组、低量造模组、高量造模组间均有显著性差异（P＜0.05）,空白对照组与高量造模组有极显著性差异（P＜0.01）;各治疗组MDA含量降低,与高量造模组,有显著性差异（P＜0.05）,且复方甲亢片组与高量造模组有极显著性差异（P＜0.01）。治疗作用有复方甲亢片组＞单纯中药组＞甲巯咪唑组。8、甲亢合并肝损害可能与肝细胞凋亡因子诱导有关,我们观察了FasL、Fas、TNFα细胞因子。模型组,FasL、Fas、TNFα细胞因子表达明显增强,空白对照组、低量造模组、高量造模组间均有显著性差异（P＜0.05）,空白对照组与高量造模组有极显著性差异（P＜0.01）;各治疗组FasL、Fas、TNFα细胞因子表达降低,与高量造模组,有显著性差异（P＜0.05）,且复方甲亢片组与高量造模组有极显著性差异（P＜0.01）。治疗作用有复方甲亢片组优于单纯中药组、甲巯咪唑组。9、甲亢合并肝损害时可能与肝核受体表达异常有关。本课题,我们对肝核受体T3Rα1、T3Rβ1亚型mRNA表达进行检测。各组中,T3Rβ1亚型mRNA表达均无显著性差异（P＞0.05）。T3Rα1亚型mRNA表达,模型组明显升高。空白对照组、低量造模组、高量造模组间均有显著性差异（P＜0.05）,空白对照组与高量造模组有极显著性差异（P＜0.01）;各治疗组T3Rα1亚型mRNA表达降低,与高量造模组,有极显著性差异（P＜0.01）,且复方甲亢片组、甲巯咪唑组与单纯中药组有显著性差异（P＜0.05）。治疗作用复方甲亢片组、甲巯咪唑组优于单纯中药组。结论1、甲亢合并肝损害特点。甲亢合并肝损害其损害程度与机体甲状腺激素水平、病程密切相关。甲状腺激素水平越高、病程越长,其肝损害出现时间越早、程度越重。2、复方甲亢片防治机理,复方甲亢片对甲亢合并肝损害防治机理,通过降低甲状腺激素水平、改善肝脏氧化代谢,可能增强机体清除氧自由基能力、降低损害细胞因子浓度、下调肝核受体基因表达,促进肝细胞修复,达到防治甲亢和发挥保肝护肝的作用。3、复方甲亢片防治作用。复方甲亢片对甲亢合并肝损害防治作用明显优于单用甲巯咪唑或单纯中药。4、复方甲亢片防治优势。复方甲亢片对甲亢合并肝损害防治优势,通过减少西药用量,减轻了西药毒副作用;可能缓解了甲亢其它并发症,促进甲亢及甲亢合并肝损害的恢复。