论文摘要
彩叶草（拉丁名：Solenostemon scutellarioides，常用名：Coleus blumei）原产印度尼西亚爪哇岛，叶色富于多种颜色，是目前常见的室内观叶植物，另外彩叶草的叶可入药，具有清热解毒及消肿之功效；在日本等一些国家还从彩叶草中提取色素以用于食品染色；最有经济开发价值的是可以从彩叶草中提取一种叫做迷迭香酸的药物。本实验试图在建立了彩叶草的再生体系的基础上利用根癌农杆菌介导的叶盘转化法建立彩叶草的遗传转化体系，同时尝试用另一种不依赖于植物组织培养的花序浸渍法（floral-dip）进行彩叶草的遗传转化的研究。实验结果如下：1．建立了以叶片、茎段和叶柄为外植体的再生体系取C3叶柄为外植体接种在MS+6-BA 1mg／L+NA0.1mg／L中，获得62％的再生频率；将C3叶片和茎段分别接种在MS+6-BA 2mg／L+NAA 1mg／L中分别获得22％和61％的再生率；将C4的茎段和叶柄分别接种在MS+6-BA 2mg／L+NAA 1mg／L中分别获得62％和64％的再生频率。2．根癌农杆菌介导的彩叶草叶盘转化体系的初步研究实验确定的彩叶草的转化条件为：将叶片切成5×5mm2，茎段和叶柄切成0.5～0.8cm，以OD600=0.5～0.8的农杆菌菌液感染叶片5min，以OD<sub>600=0.8的农杆菌菌液感染茎段和叶柄8min，然后用无菌滤纸将多余菌液吸干，暗培养60～84h后用含400 mg／LCef的液体MS培养基振荡脱菌2h，无菌水冲洗4～5次后用无菌滤纸吸取多余水分，然后叶片接入MS1+200 mg／LCef+50 mg／LKm的培养基中进行筛选分化培养。3．获得了较高的以叶片、茎段、叶柄为受体的GUS基因的瞬时表达将脱菌后的叶片、茎段、叶柄用GUS染液进行染色，叶片的GUS+率最高可达100％，染色面积平均占叶片总面积的70％左右；茎段和叶柄的GUS+率最高可达85％，染色部位主要集中在两端伤口处。4．对花序浸渍转化法的一些影响因素进行了初步研究。确定了花序浸渍转化法的一些参考条件：将有少数花蕾已经开放，其他花蕾正要开放的花序在浸渍渗透液(MS+6-BA5 mg／L+5％蔗糖+0.05％表面活性剂（Silwet L-77）+(OD600=0.5～0.8的)农杆菌液)中浸泡3min，套上保鲜薄后在25～27℃的温度下暗培养48h，然后取掉保鲜薄后在温室中培养，种子成熟后，收集种子将其消毒后接种在1／2MS+Km50mg／L的培养基中进行筛选。