论文题目: 人源化氨基端脂多糖结合蛋白（NH－LBP）基因工程抗体的构建及其生物学活性研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 病理学与病理生理学
作者: 王长松
导师: 刘友生
关键词: 杆状病毒昆虫细胞表达系统,脂多糖结合蛋白,基因工程抗体,单链抗体,核糖体展示,嗜甲醇毕赤酵母细胞,生物学活性
文献来源: 第三军医大学
发表年度: 2005
论文摘要: 背景: 内毒素血症（endotoxemia）是临床创（烧）伤病人最常见的并发症之一。LPS是G-细菌细胞壁外膜的主要成分,当细菌死亡时LPS释放入血,由肝细胞产生的LBP将其传递给靶细胞膜上的CD14（mCD14）或血液循环中的可溶性CD14（sCD14）,三者形成LPS/LBP/CD14三联复合体,再经过TLR4-MD2-MYD88跨膜受体识别复合物向靶细胞内传递信号,促使胞浆内的NF-κB易位至胞核,导致一系列转录因子的活化,进而释放大量炎性介质和细胞因子,诱发全身炎症反应综合征（SystematicInflammatory Response Syndrome,SIRS）、多器官功能不全综合征（Multiple OrganDysfunction Syndrome,MODS）。在生理状态下循环血液中只有5—10μg/ml的LBP,在内毒素血症时LBP的浓度可以增高10倍左右,低浓度的LBP可将LPS与CD14的结合放大3-4个数量级。经定点突变以及LBP衍生肽的竞争性抑制研究,提示LBP结合LPS的位点定位于LBP氨基末端部分的第91-100位氨基酸残基。因此推测阻断LBP与LPS的结合有可能中断或减弱LPS活化靶细胞的效应,能够阻断这种保留与LPS结合序列的截断型人氨基末端LBP（NH-Lipopolysaccharide bmdmg protein,NH-LBP）的抗体对全长LBP可能具有同样的阻断效应。 目前针对拮抗LBP的研究如动物源性的单克隆抗体,小分子多肽等还处于实验室阶段,研究结果显示动物源性的抗体存在以下局限性:制备工艺复杂,难以大量生产;杂交瘤细胞的稳定性较差;容易产生人抗鼠抗体（HAMA）;难以制备融合蛋白等。全长抗体由于分子量较大,在组织内的渗透性较差,从血液循环中清除速度慢。近年来随着分子生物学和分子免疫学的迅速发展出现了基因工程抗体,使人们得以对动物源性的单克隆抗体进行改造,构建人鼠嵌合抗体或全人源化抗体,而且抗体的形式也多样化如scFv,dsFv,双功能抗体,Fab’,Fab’2和miniantibody等。基因工程抗体既可从杂交瘤细胞中制备,也可从未经免疫的脾淋巴细胞或人外周血单核细胞中产生:可
论文目录:
英文缩略词表
英文摘要
中文摘要
论文正文 人源化氨基端脂多糖结合蛋白(NH-LBP)基因工程抗体的构建及其生物学活性研究
前言
第一部分 重组人源化氨基末端LBP在杆状病毒载体表达系统的表达、纯化和鉴定
材料与方法
结果
讨论
照片
参考文献
第二部分 人源化scFv抗体库的构建及NH-LBP抗体的体外翻译、筛选
材料与方法
结果
讨论
照片
参考文献
第三部分 NH-LBP scFv抗体在嗜甲醇毕赤酵母细胞中的表达
材料与方法
结果
讨论
照片
参考文献
第四部分 抗NH-LBP scFv抗体生物学活性的初步观察
材料与方法
结果
讨论
照片
参考文献
全文总结
致谢
文献综述一
参考文献
文献综述二
参考文献
攻读博士学位期间发表论文
发布时间: 2005-11-08
参考文献
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