论文摘要
转化生长因子β1（TGF-β1）属于生长因子超家族,其生物学效应非常广泛,主要包括调节细胞增殖和分化、参与胚胎发育调节、促进细胞外基质（ECM）形成和抑制免疫反应等。TGF-β1在包括肺癌在内的多种恶性肿瘤细胞中常呈高表达,并可由癌旁基质细胞产生。目前认为,在肿瘤早期TGF-β1抑制原癌基因c-myc等,阻止细胞生长周期从G1期进入S期;而在肿瘤的中晚期（肿瘤浸润血管逐渐开始形成）,TGF-β1可通过促进血管生成、肿瘤细胞迁移、免疫抑制等途径为肿瘤的生长、浸润及转移提供适宜的微环境,使肿瘤细胞表现恶性特征。对非肿瘤细胞的观察发现,TGF-β1对细胞中Fas/FasL蛋白表达具有调控作用。Fas/FasL为重要的细胞凋亡途径,在非肿瘤细胞中TGF-β1通过上调Fas表达,从而激活Fas/FasL凋亡信息链中的凋亡蛋白酶caspase家族诱导细胞发生凋亡。另外,TGF-β1与细胞内TGF-β1受体结合后,亦能通过下游信号smad蛋白激活caspase家族引起细胞凋亡。因此,TGF-β1可看作是一个诱导细胞凋亡的细胞因子,在机体内发挥清除异常细胞的重要作用。但TGF-β1与肿瘤细胞凋亡的关系尚不明确,目前国内外鲜有肿瘤细胞中TGF-β1与Fas/FasL凋亡信号通路之间关系的研究报道。为探讨TGF-β1与肿瘤细胞凋亡的关系,本实验按如下三个部份进行研究。第一部分通过siRNA靶点序列设计软件结合Angela siRNA设计原则,设计、合成TGF-β1特异性siRNA靶点序列;再将靶点序列插入PAVU6+27质粒构建siRNA质粒;通过免疫荧光、免疫印记等方法检测转染siRNA质粒后人A549肺癌细胞株中TGF-β1的表达水平。第二部分将TGF-β1特异性小干扰RNA质粒pOligo1216和无关对照质粒pOligo Control转染肺腺癌A549细胞,检测TGF-β1 siRNA质粒转染后（即TGF-β1被静默后）,上述A549细胞中Fas/FasL分子表达与凋亡酶caspase-3、caspase-8的活性;然后通过蛋白转染剂,将TGF-β1蛋白导入A549细胞,检测细胞内TGF-β1蛋白上调后细胞中Fas/FasL分子表达与凋亡酶caspase-3、caspase-8的活性,以了解TGF-β1对人肺腺癌细胞Fas/FasL凋亡通路的影响。第三部分参照Saitoh、Crowley等学者所报告的方法,首先检测人肺腺癌A549细胞与Calu-6细胞的HLA-ABDR等位基因,再构建稳定表达HLA-A2的人肺腺癌细胞系,通过混合淋巴细胞肿瘤细胞培养（MLTC）的方法,对诱导刺激健康人PBL产生肺癌特异性CTL作了初步的研究与探索。
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