论文摘要
目的肿瘤坏死因子受体相关因子（Tumor necrosis factor receptor-associated factor，TRAF）是一类重要的胞浆衔接蛋白，它们参与多个细胞内信号转导通路，引发相应的基因活化，其中最主要的是引起NF-κB和JNK的活化，从而调节正常和肿瘤细胞的增殖、存活、凋亡并诱导内皮细胞出芽等。迄今为止共发现7种TRAFs家族成员，其中以TRAF1最为特殊。国内外关于TRAF1在TNFR信号通路中所发挥的作用及其作用方式存在不同看法：有些研究认为TRAF1在TNFR家族诱导的NF-κB激活中作为负性调控子存在，而又有些研究认为，在细胞系中外源性转染TRAF1使之过表达可促进NF-κB的激活。在TRAFs成员中TRAF1与TRAF2的关系最为密切，二者可形成二聚体共同参与信号转导。目前关于TRAF1在乳腺癌中表达及意义的研究尚少。本实验主要应用免疫组化S-P法，Western Blot方法研究TRAF1在正常乳腺上皮细胞系以及乳腺癌不同转移性细胞系中的表达和意义，并且运用免疫共沉淀的方法研究TRAF1与TRAF2在上述细胞系中结合量的改变及其意义。材料与方法1、材料正常乳腺上皮细胞系MCF-10A，人雌激素受体依赖性乳腺癌细胞系MCF-7（低转移），人雌激素受体非依赖性乳腺癌细胞系MDA-MB-231（中转移）和MDA-MB-435s（高转移）。2、方法（1）应用免疫组化方法检测TRAF1在培养的正常乳腺上皮细胞系MCF-10A，乳腺癌细胞系MCF-7（低转移）、MDA-MB-231（中转移）、MDA-MB-435s（高转移）中的表达。（2）应用Western blot方法检测TRAF1在培养的正常乳腺上皮细胞系MCF-10A，乳腺癌细胞系MCF-7（低转移）、MDA-MB-231（中转移）、MDA-MB-435s（高转移）中的表达。（3）应用免疫共沉淀方法检测TRAF1和TRAF2在正常乳腺上皮细胞系MCF-10A，乳腺癌细胞系MCF-7（低转移）、MDA-MB-435s（高转移）中的结合情况。（4）应用SPSS12.0统计分析软件，对TRAF1在各细胞系中的表达量以及TRAF1与TRAF2在各细胞系中的结合量进行方差分析及其两两比较，P＜0.05为有统计学意义，P＜0.01为有显著统计学意义。结果1、免疫组化方法检测TRAF1在正常乳腺上皮细胞系及乳腺癌不同转移性细胞系中的表达。（1）TRAF1在正常乳腺上皮细胞系MCF-10A中的表达显著低于各乳腺癌细胞系，分别是：MCF-7（低转移，P＜0.05），MDA-MB-231（中转移，P＜0.01），MDA-MB-435s（高转移，P＜0.01）。（2）TRAF1在几种乳腺癌不同转移性细胞系中的表达量为：MCF-7（低转移）显著低于MDA-MB-231（中转移，P＜0.01），并显著低于MDA-MB-435s（高转移，P＜0.01）；MDA-MB-231（中转移）显著低于MDA-MB-435s（高转移，P＜0.05）。可见：随着乳腺癌转移性的增加，TRAF1的表达量递增。2、Western blot方法检测TRAF1在正常乳腺上皮细胞系及乳腺癌不同转移性细胞系中的表达。（1）TRAF1在正常乳腺上皮细胞系MCF-10A中的表达显著低于各乳腺癌细胞系，分别是：MCF-7（低转移，P＜0.05），MDA-MB-231（中转移，P＜0.01），MDA-MB-435s（高转移，P＜0.01）。（2）TRAF1在几种乳腺癌不同转移性细胞系中的表达量为：MCF-7（低转移）显著低于MDA-MB-231（中转移，P＜0.05），并显著低于MDA-MB-435s（高转移，P＜0.01）；MDA-MB-231（中转移）显著低于MDA-MB-435s（高转移，P＜0.05）。可见：随着乳腺癌转移性的增加，TRAF1的表达量递增。3、免疫共沉淀检测TRAF1和TRAF2在正常乳腺上皮细胞系及乳腺癌不同转移性细胞系中的结合情况。（1）TRAF1与TRAF2在MCF-10A（正常）、MCF-7（低转移）、MDA-MB-435s（高转移）三种细胞系中均结合。（2）TRAF1与TRAF2的结合量为：MCF-10A（正常）显著高于MCF-7（低转移，P＜0.05），并显著高于MDA-MB-435s（高转移，P＜0.01）；MCF-7（低转移）显著高于MDA-MB-435s（高转移，P＜0.05）。可见：随着乳腺癌转移性的增加，TRAF1与TRAF2的结合量递减。结论1、TRAF1在乳腺癌细胞系中的表达显著高于正常乳腺上皮细胞系，并且随着乳腺癌细胞系转移性的增加，TRAF1的表达量递增。2、TRAF1与TRAF2在正常乳腺上皮细胞系及各乳腺癌细胞系中均结合。3、TRAF1与TRAF2的结合量在正常乳腺上皮细胞系中高于各乳腺癌细胞系，随着乳腺癌细胞系转移性的增加，其结合量递减。·提示TRAF1可能通过与TRAF2的结合而发挥作用，且负性调控TRAF2介导的信号通路。
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