基于SSR标记的花生抗感黄曲霉种质遗传多样性分析

论文摘要

花生是最易受黄曲霉侵染的农作物之一，我国也是世界上受到黄曲霉毒素污染严重的国家之一。加强黄曲霉资源的遗传评价，发掘优良抗黄曲霉种质，建立先进筛选技术十分必要。本研究针对有关花生遗传多样性的研究主要集中于农艺性状方面，而花生基因组DNA水平上的遗传多样性尚未深入研究的现状，选取了40抗感黄曲霉花生种质资源，采用SSR分子标记技术，从DNA水平上研究花生抗感黄曲霉资源的遗传多样性，揭示种质资源的遗传变异和亲缘关系。研究结果表明：1.筛选适合SSR分子标记技术的基因组DNA提取方法，利用改良CTAB法提取的基因组DNA在质量上能够完全满足SSR分子标记的需要，同时通过异丙醇和70%乙醇溶液的预冷，可大大提高抽提的效率并且提高DNA质量。这种提取方法适合大量快速的提取植物基因组DNA。2.花生抗感品种中存在着丰富的多态性，本本次试验共得到多态性引物35对，共扩增229条带，其中多态性条带数为169，占总条带数的73.8%，每个位点的等位基因为2-12个，平均5.51个。其中PM15所得条带数最多，为15条；最少的是PM375，只有3条。3.35对引物的PIC值在0.305-0.843之间变动，在35个位点中只有少数的几对引物（PM188、pPGPseq-4H11、Ah3、RM14E11、gc25、gc53、GNB837、GNB613）小于0.5，说明所选标记具有很高的多态性能够在分子水平上准确反映各品种或类型间的遗传关系。4.35对引物基本可以将40份材料分开，采用NTSYSpc2.1的UPGMA法对SSR结果进行SHAN聚类分析，后通过Tree Plot聚类分析树状图表明，当阈值为0.56时可以将所有材料分为两大类，证明在两大群花生中都有抗黄曲霉材料的存在，在相关系数为0.71时，分为五个小组,从上到下抗病品种AR-1，AR-2，KB153，KB154，XW84，XW85，XW87，KB113，KB157，UF71533-1，XW83，XW101，XW88，AR-3，GFA-A以及ICGV系列的材料和新会小粒相似系数很高，被分在了一个小组；感病品种金花1012和白沙1016也同样被分在了一个小组；感病品种香乡和AR-4等抗病品种分在了第三小组；抗病品种ICGV92196单独一组；抗病品种湛秋48和感病品种泉花10号被分在第五小组。聚类分析表现了很强的地域性，同一来源的种质被聚类到一起，表明地理因素是品种形成的关键因素，并且聚类结果和表现型分类基本一致。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 项目研究意义
• 1.2 文献综述
• 1.2.1 黄曲霉毒素简介
• 1.2.2 花生抗黄曲霉机理与影响因素
• 1.2.3 黄曲霉毒素污染的控制技术
• 1.2.4 DNA 分子标记的方法和原理
• 2 基因组 DNA 的提取方法的筛选和检测
• 2.1 主要试剂和仪器
• 2.2 研究材料
• 2.3 试验方法
• 2.3.1 育苗
• 2.3.2 CTAB 法提取花生基因组 DNA
• 2.3.3 SDS 法提取花生基因组 DNA
• 2.3.4 DNA 质量检测
• 2.3.5 PCR 的体系及条件
• 2.3.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 2.4 实验结果
• 2.4.1 花生叶片基因组 DNA 的提取以及质量检测
• 2.4.2 CTAB 法所提 DNA PCR 扩增效果
• 2.5 本章小结
• 3 花生抗黄曲霉种质 SSR 引物的筛选
• 3.1 主要试剂和仪器
• 3.2 试验方法和材料
• 3.3 SSR 引物的筛选结果
• 3.4 本章小结
• 4 抗黄曲霉种质的 SSR 分析
• 4.1 试剂和仪器
• 4.2 材料与方法
• 4.3 遗传多样性分析
• 5 讨论
• 5.1 基因组 DNA 提取的选择
• 5.2 SSR 标记在分析种质亲缘关系上的优势
• 5.3 花生抗黄曲霉种质遗传多样性及其在育种中的利用潜力
• 6 结论
• 展望
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果