利用基因芯片和组织芯片研究办癌发生的分子机制及与细胞调亡的关系

论文题目: 利用基因芯片和组织芯片研究办癌发生的分子机制及与细胞调亡的关系

论文类型: 博士论文

论文专业: 生理学

作者: 孙抒

导师: 许文燮,李在琉

关键词: 基因芯片,组织芯片,胃肿瘤,癌前病变,细胞凋亡,细胞增殖

文献来源: 延边大学

发表年度: 2005

论文摘要: 胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,胃癌的发生、发展是多因素、多步骤和多基因改变的复杂过程,其发病机制尚未完全阐明。本研究为了探讨基因表达谱芯片和组织芯片技术在高通量筛查肿瘤相关基因群及研究胃癌分子病理学变化中的应用价值,通过研究人胃癌组织和癌旁正常组织中差异表达的基因,寻找出与胃癌发生的相关基因,在基因水平上确定胃癌相关标志物;通过原位观察胃癌及其癌前病变中细胞凋亡与细胞增殖的表达,及对部分凋亡调控基因和蛋白酶的表达分析,探讨凋亡相关调控基因和凋亡关键效应酶在胃癌恶性转化进程中的作用,为胃癌的进一步研究、诊断、治疗提供理论及实验依据。 本实验将包含4096条人cDNA用点样仪在特制玻片上制备成表达谱芯片,按一步法抽提胃腺癌和对照组正常胃粘膜组织的总RNA,通过逆转录方法将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两种组织cDNA上,制成探针,并与表达谱芯片进行杂交及扫描芯片荧光信号图像,通过计算机数据处理分析两种组织之间差异表达的基因;应用组织芯片技术,通过免疫组织化学方法分别检测21例胃癌、19例癌旁组织和21例正常胃粘膜标本中Cathepsin D和CD9表达情况,对基因芯片检测结果进行部分验证;利用DNA末端标记技术（TdT—mediated dUTP—blotin nick end labeling,TUNEL法）和增殖细胞核抗原免疫组织化学技术原位观察了46例胃癌、20例癌前病变、24例正常粘膜中的凋亡细胞和增殖细胞;通过免疫组织化学法原位观察了凋亡相关基因P53、bcl—2、c—myc蛋白的阳性表达率,探讨与细胞凋亡的关系;利用组织芯片通过免疫组织化学技术S—P法对凋亡关键效应酶Caspase—3、Caspase—8在胃癌、癌旁和正常胃粘膜中的表达进行了检测。

论文目录:

中文摘要

英文摘要

前言

第一章 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 实验材料

1．1．2 主要试剂

1．1．3 主要仪器

1．2 方法

1．2．1 基因表达谱芯片实验

1．2．2 组织芯片进行免疫组织化学染色

1．2．3 病理组织切片进行免疫组织化学染色

1．2．4 细胞凋亡检测

1．3 统计学处理

第二章 结果

2．1 总RNA抽提结果

2．2 芯片杂交技术体系验证

2．3 基因芯片杂交的结果分析

2．4 扫描图像结果

2．5 差异表达基因筛选

2．6 利用组织芯片对所筛选基因进行验证

2．7 胃癌及其癌前病变中的细胞凋亡和细胞增殖的形态学观察

2．8 免疫组织化学法检测凋亡相关基因蛋白表达水平

2．9 胃癌及其癌前病变中凋亡相关基因蛋白的表达与细胞凋亡的关系

2．10 用组织芯片对细胞凋亡关键效应酶caspase-3，caspase-8检测

第三章 讨论

3．1 利用基因芯片技术筛选胃腺癌差异表达基因

3．2 组织芯片是cDNA芯片技术的发展和延伸

3．3 胃癌及其癌前病变中细胞凋亡和细胞增殖的关系

3．4 胃癌及其癌前病变中细胞凋亡与凋亡调控基因蛋白表达的关系

3．5 胃癌及癌旁组织中死亡蛋白酶(caspase3、8)与细胞凋亡的关系

第四章 结论

英文缩略表

致谢

附图

参考文献

文献综述

参考文献

发布时间: 2005-11-22

参考文献

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