尼古丁、TNF-α和淫羊藿对体外培养成骨细胞骨桥蛋白表达的影响

论文摘要

第一章 大鼠成骨细胞的体外培养和鉴定 目的：从正常新生大鼠颅骨中分离培养大批成骨细胞并进行功能鉴定，为进一步研究作准备。 方法：将新生SD大鼠处死，无菌条件下取出颅骨，剔净后剪成1mm×1mm×1mm碎块，0.1％胶原酶Ⅱ消化15分钟，碎骨块接种于培养瓶中培养，通过观察细胞形态学及钙化结节、碱性磷酸酶染色进行鉴定。 结果：用改良组织块法分离的大鼠成骨细胞，在体外培养时可维持其在体内的功能：合成碱性磷酸酶，最终能形成矿化结节。 结论：用改良组织块法进行大鼠成骨细胞培养，方便易行，可分离、培养大量高纯度成骨细胞，在体外传代后仍保留其表型特征，可供进一步研究使用。 第二章 尼古丁对体外培养成骨细胞骨桥蛋白表达的影响 目的：探讨尼古丁对体外培养大鼠成骨细胞骨桥蛋白表达的影响。 方法：取第四代体外培养大鼠成骨细胞，当传代细胞生长至80％汇合时，分三组分别加入尼古丁、尼古丁和阿曲库铵苯磺酸盐（筒箭毒碱）及空白，继续培养48小时。收集细胞按异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取细胞总RNA，RT-PCR分析各组成骨细胞表达OPN mRNA的差异。提取总蛋白，Westem blotting法测定蛋白表达水平，免疫沉淀法检测蛋白磷酸化程度。 结果：尼古丁干预组RT-PCR条带光密度值的OPN／β-actin比值（1.35±0.08）高于对照组（0.99±0.08）及尼古丁+阿曲库铵苯磺酸盐干预组（1.03±0.09），差异有显著性（P＜0.05）；尼古丁组OPNWestern blotting的条带光密度值（161.98±9.00）高于尼古丁+阿曲库铵苯磺酸盐干预组（151.10±7.99）及对照组（147.74±4.99），其差异有显著性（P＜0.05）；尼古丁组OPN免疫沉淀的条带光密度值

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、英文缩略词表
• 四、前言
• 五、正文
• 第一章
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 实验结果
• 1.4 讨论
• 第二章
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 实验结果
• 2.4 讨论
• 第三章
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 实验结果
• 3.4 讨论
• 第四章
• 4.1 实验材料
• 4.2 实验方法
• 4.3 实验结果
• 4.4 讨论
• 六、结论
• 七、综述
• 综述一
• 综述二
• 八、参考文献
• 九、致谢
• 十、在读期间发表论文