臭氧水治疗慢性骨髓炎的路径选择及机理研究

论文摘要

研究背景:慢性骨髓炎难以治疗、复发率高,是骨科的难症之一。慢性骨髓炎的治疗基本原则之一就是在充分的抗菌素治疗基础上彻底清除病灶。尽管采用了彻底的清创方法,但局部仍有一定数量的细菌残留。在一定条件下,这些细菌易大量繁殖,常导致治疗失败。同时由于局部血供差,导致机体在局部发挥杀灭细菌免疫功能困难。抗生素的局部应用越来越受到人们的重视,抗生素的局部应用可以直接作用于病变部位,不需血液将药物抗生素携带至病变区域,可在局部获得持续的较高药物浓度,同时保持较低的血药浓度,避免抗生素全身系统用药的毒副作用。但是随着近年来抗生素的不合理应用,慢性骨髓炎致病菌种类发生变化,产生细菌变异,细菌耐药,抗生素的治疗效果逐渐下降。所以,寻找一种新型的抗微生物剂治疗骨髓炎,成为本课题的目的之一。臭氧有极好的杀菌、抗炎以及促进创面愈合作用,并且不易产生细菌耐药,封闭负压吸引起到很好的引流作用,臭氧水灌注负压吸引为慢性骨髓炎的治疗提供了一种有效的新方法。目的研究不同浓度臭氧水对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的杀灭作用,以及对臭氧水抗炎作用的机理进行研究。制备金黄色葡萄球菌感染的大鼠胫骨慢性骨髓炎的动物模型,并在大鼠胫骨近端慢性骨髓炎动物模型的基础上,研究臭氧水灌洗负压吸引治疗大鼠胫骨慢性骨髓炎的治疗效果,为慢性骨髓炎的治疗提供一种既能杀菌又能抗炎的新方法,并为其进一步临床应用提供实验依据。方法本实验由4部分组成1、臭氧水对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌杀灭作用的实验研究取实验菌金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌用无菌生理盐水制备成菌悬液,麦氏比浊法调整含菌量,分别用不同浓度的臭氧水溶液处理不同的时间作用于两种菌悬液,计算两种细菌的杀灭率。2、臭氧水抗炎作用的实验研究在二甲苯致小鼠耳肿胀模型的基础上,分别采用2mg/L臭氧水溶液、扶他林膏剂、及生理盐水湿敷创面,通过观察耳壳厚度差、重量差、血清TNF-a检测和组织病理学,探讨臭氧水抗炎作用的机理。3、大鼠胫骨慢性骨髓炎动物模型的建立及评价采用胫骨近段髓腔注射5%鱼肝油酸钠和不同浓度的金黄色葡萄球菌菌液的方法诱导骨髓炎,并探讨诱导的骨髓炎模型与菌液浓度的关系,为慢性骨髓炎的实验研究提供一种合适的动物模型。4、臭氧水灌注负压吸引治疗大鼠胫骨慢性骨髓炎的实验研究在大鼠慢性骨髓炎模型的基础上,常规病灶清创,分别采用2mg/L的臭氧水,庆大霉素溶液、生理盐水局部灌注骨髓炎创面,半透膜封闭,间断负压引流,通过大体标本观察、放射学、细菌学、ELISA法和组织病理学方法,阐明臭氧水局部应用治疗实验性大鼠胫骨慢性骨髓炎的效果。结果1、臭氧水对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌杀灭作用的实验研究2种主要的致骨髓炎的标准菌株金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌所需的臭氧水的杀菌条件相近,2mg/L臭氧水溶液作用60s或者1mg/L臭氧水溶液作用60s （铜绿假单胞菌）, 90s （金黄色葡萄球菌）均可100%杀死菌悬液中的细菌。2、臭氧水抗炎作用的实验研究臭氧水组（A组）、扶他林组（B组）、生理盐水组（C组）对小鼠耳肿胀模型耳壳重量差进行统计学分析示:A,B组明显小于C组（P<0.01）,A、B组比较无明显统计学差异（P>0.05）;血清TNF-a浓度检测示:A、B组明显小于C组（P<0.01）,A、B组比较无明显统计学差异（P>0.05）。组织学观察显示:生理盐水组表皮细胞间及细胞内水肿,能发现较多的单一核细胞及少数多形核细胞的浸润,真皮结缔组织水肿,血管周围可见轻度炎症细胞浸润;臭氧水组及扶他林组水肿消退,炎性细胞浸润减少。3、大鼠胫骨慢性骨髓炎动物模型的建立及评价A组（注入0.lml生理盐水）,B组（注入0.lml 1×106 CFU/ml细菌）,C组（注入0.lml 1×108 CFU/ml细菌）,D组（注入0.1 ml 1×1010 CFU/ml细菌）,各组造模后4周,影像学显示出现不同程度的软组织肿胀,骨密度降低,骨小梁纤细,骨小梁间隙加宽,骨皮质变薄,骨溶解,死骨形成;组织学切片显示均出现不同程度的中性嗜酸性粒细胞浸润,骨髓腔内骨细胞不同程度坏死。注入0.lml 1×108 CFU/ml细菌,即可获得可靠稳定的大鼠胫骨慢性骨髓炎模型。4、臭氧水灌注负压吸引治疗大鼠胫骨慢性骨髓炎的实验研究术后2周各组Norden改良骨髓炎分值进行统计学分析显示:臭氧水组（A组）、庆大霉素溶液组（B组）、生理盐水组（C组）比较差异有非常显著性;术后2周,大体标本可见A、B组保持较正常外观形状,末发现明显的骨质破坏及髓腔脓液,C组标本外形粗大,骨质破坏明显,骨缺损边缘有不规则增生及硬化,其间可见脓性分泌物;术后7、14天时,每克骨组织标本细菌计数转换成对数后进行统计学分析结果显示:A、B组细菌计数明显小于C组（P<0.01）,A、B组比较,A组细菌计数小于B组（P<0.05）;术后7、14天时,局部骨组织TNF-a浓度示:A、B组TNF-a浓度明显小于C组（P<0.01）,A、B组比较,A组浓度小于B组（P<0.05）;组织学观察显示:A、B组炎症反应明显较C组轻,A组又较B组炎症反应轻。结论:2mg/L的臭氧水的能够有效杀灭金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌,并且能抑制炎症反应的进程,促进炎症反应的消退;臭氧灌注负压吸引系统在大鼠胫骨慢性骨髓炎的治疗中,臭氧水能够控制感染、抑制局部炎症反应、促进组织修复,改善骨髓炎的骨组织病理改变,负压吸引能通畅引流,避免臭氧泄漏造成的环境污染,可逐渐替代局部抗生素的应用,为慢性骨髓炎的治疗提供了一种新的途径。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 前言
• 第一部分 臭氧水对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌杀灭作用的实验研究
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 臭氧水抗炎作用的实验研究
• 引言
• 材料与方法
• 观察指标
• 结果
• 讨论
• 小结
• 图片
• 参考文献
• 第三部分 慢性骨髓炎模型的建立及评价
• 引言
• 材料与方法
• 统计学处理
• 结果
• 讨论
• 小结
• 图片
• 参考文献
• 第四部分 臭氧灌注负压吸引治疗大鼠胫骨慢性骨髓炎的实验研究
• 引言
• 材料与仪器
• 实验前准备
• 分组及实验过程
• 实验相关指标的观察
• 统计学分析
• 实验结果及分析
• 讨论
• 小结
• 图片
• 参考文献
• 全文总结
• 综述一
• 参考文献
• 综述二
• 参考文献
• 在读期间发表论文和科研情况
• 致谢