论文摘要
目的探索孕妇血浆中游离胎儿DNA的检测方法,为使用孕妇血浆中游离胎儿DNA信息进行无创伤性产前诊断和法医学亲子鉴定中的临床开展提供理论基础。方法抽取妊娠中期（16～30周）孕妇外周血5ml,ACD抗凝。同时所有孕妇在B超指示下行羊水穿刺得到羊水5～10ml。抽取相应孕妇丈夫静脉血2ml为对照。孕妇外周血经离心后取上清,采用改进QIAamp离心柱型DNA提取方法提取孕妇外周血浆总DNA。同时提取孕妇全血,丈夫全血以及胎儿羊水基因组DNA。以孕妇,父亲和胎儿羊水基因组DNA基因型为对照,首先采用STR-PCR对10例孕妇外周血浆DNA进行6个STR位点的扩增,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析胎儿游离DNA提取效果及检测效率。又用多重荧光PCR方法对另10例孕妇外周血血浆总DNA进行16个STR位点的扩增,ABI310基因遗传分析仪毛细管电泳及荧光检测,分析游离胎儿DNA的提取效果及检测效率。结果两种实验方法均能在孕妇血浆中检测到胎儿特异性DNA序列。在采用STR-PCR对孕妇外周血浆中胎儿DNA进行检测实验中,10例孕妇共检测60个STR位点,18个位点成功检出胎儿DNA基因型,检出率30%。检出率最高的位点是D13S317;在多重荧光PCR STR多位点的复合扩增检测孕妇血浆中游离胎儿的实验中,10例孕妇共检测160个位点,确定检35个位点成功检出胎儿DNA基因型,检出率22%。检出率最高的位点是D21S11和D8S1179。不同扩增片断大小的STR位点检测效率也不同,片断大于300bp扩增产物的STR位点多无检测结果。结论改进QIAamp离心柱型DNA提取方法提取孕妇外周血浆中DNA,采用STR-PCR和多重荧光PCR-STR多位点的复合扩增都能检测到孕妇血浆中的胎儿特异性DNA序列。有望将孕妇血浆游离胎儿DNA应用到无创伤性产前遗传性疾病的诊断和法医学亲子鉴定中。
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