论文摘要
研究目的吡虫啉是一种新型氯代烟碱类内吸性广谱杀虫剂,其胃毒与触杀作用较为突出。吡虫啉类杀虫剂的作用机制与其他杀虫剂不同,与其他杀虫剂一般无交互抗性。由于它高效、低毒、杀虫谱广、持效期长,吡虫啉被大量广泛的使用,结果造成对果蔬等农作物和环境的污染。因此我们急需进行果蔬等试样中该农药的净化及测定方法研究,建立一种简单、快速、高效的吡虫啉残留监测技术,以便及时、准确地对污染情况进行分析、监测,有效防止和减少对农作物和环境的污染,并通过进行不同浓度吡虫啉胁迫对蔬菜体内抗氧化酶活性、蛋白系统及谷胱甘肽的影响的研究,搞清不同浓度胁迫与蔬菜体内上述活性物质之间的剂量-效应关系,搞清蔬菜中吡虫啉残留量与上述活性物质之间剂量-效应的关系,初步建立农药污染敏感指示生物标志物的筛选过程,以期找到遭受该农药胁迫时,植物体反应比较敏感的生物标志物,作为该农药污染的早期诊断指标。研究方法1.种植玻璃生菜4个小区,试验前不施肥,不喷药。当幼苗长至10cm时第1次喷药,以后每隔2d喷1次,共喷施3次。三个小区施药浓度分别为0.1%（高）、0.02%（中）、0.005%（低）（推荐使用量）,另设一不喷药的空白对照小区。最后一次喷洒吡虫啉后的第0d、1d、3d、5d、7d、9d、11d,按照算双对角线法分别采取健康生长的玻璃生菜叶片。每次取样时,每个浓度取三个平行样。取样分别进行吡虫啉残留测定和抗氧化物酶（过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶）活性、多酚氧化酶活性、谷胱甘肽和蛋白质含量的测定。2.采用二氯甲烷提取、氧化铝和硅镁吸附剂层析柱净化、石油醚淋洗、甲醇洗脱、旋转蒸发仪浓缩、高效液相色谱法（HPLC）检测其含量。3.过氧化物酶（POD）活性、过氧化氢酶（CAT）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、多酚氧化酶（PPO）活性、谷胱甘肽（GSH）含量、蛋白质含量分别采用愈创木酚法、紫外吸收法、NBT光照还原法、分光光度法、Ellman法和考马斯亮蓝G-250染色法。结果1.吡虫啉在生菜中的平均加标回收率为97%～100.4%,精密度为3.5%～4.1%,最低检出限为0.16ng。残留消解动态研究结果为,低浓度处理组的降解方程y=687.89e-0.345x,半衰期为2.67天;中浓度组的降解方程y=1979.88e-0.379x,半衰期为2.43天;高浓度组的降解方程y=7233.81e-0.466x,半衰期为1.53天。2.吡虫啉对生菜的POD活性影响显著,处理组POD活性明显高于对照组,处理组浓度越高,POD活性最高。在实验的天数内,对照组与低、中、高浓度三个浓度处理组POD活性有显著性差异（p＜0.05）,有统计学意义。3.吡虫啉对生菜CAT活性影响显著,处理组CAT活性均高于对照组,对照组和处理组CAT活性有显著性差异（p＜0.05）,有统计学意义。4.喷洒农药吡虫啉后,处理组中SOD活性显著增高,低浓度组5d达到最大值,中、高浓度组7d达到最大值,出现峰值后又急剧下降,对照组和处理组SOD活性有显著性差异（p＜0.05）,有统计学意义。5.高、低2个浓度处理组的PPO活性明显高于对照组,低浓度组高于高浓度组,低浓度组的PPO活性于喷洒农药当天即开始明显升高,第7d达到最大值,此时,PPO活性为对照组的3.3倍,此后逐渐降低,11d时仍与对照组有显著性差异（p＜0.05）;高浓度组PPO活性于喷洒农药当天即开始升高,第5d达到最大值,此时PPO活性是对照组的1.9倍,11d左右与对照组基本一致。6.施用吡虫啉后,高、低两个浓度处理组的蛋白质含量均明显低于对照组,浓度越高,蛋白质含量越低,低浓度组第5d达到最低值,此后逐渐增加,11d左右与对照组基本一致;高浓度组蛋白质第1d后开始降低,第7d达到最小值,11d时仍与对照组有显著性差异。7.高、低两个浓度处理组GSH表现出相似的变化趋势,即在胁迫初期GSH含量急剧降低,低浓度处理组在第五天GSH下降到最低点,高浓度处理组GSH在第7d下降到最低点,此后两组GSH含量逐渐开始升高,低浓度组在第11d左右无对照组基本达到一致。结论1.本实验所采用的前处理及检测方法适合蔬菜中烟碱类农药残留的快速检测。2.吡虫啉农药在生菜体内降解迅速。3.POD、SOD、CAT、PPO、GSH、蛋白质均可作为吡虫啉胁迫生菜的生物标志物。