黄芩苷对人淋巴细胞Toll样受体的调节

论文摘要

目的:研究黄芩苷对人淋巴细胞Toll样受体（TLR）的调节,探讨其在免疫调节方面的作用。方法: 1.采用尼龙毛分离法分离人外周血T和B细胞;2.采用UF-50流式分析寻找最佳黄芩苷作用浓度;3.采用实时定量荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）,分析在最佳黄芩苷作用浓度处理前后TLRs的表达情况;4.通过受体抑制实验和实时定量荧光RT-PCR探讨黄芩苷对TLRs的调节位点。结果:1.体外孵育48h后,1mg/ml的黄芩苷可以显著促进人T、B淋巴细胞增殖（P<0.05）;2.使用1mg/ml黄芩苷相对于未用黄芩苷处理的T、B细胞,其TLR3、TLR7、TLR8及TLR9mRNA的表达均有显著增加（P<0.05）,T细胞增加倍数分别为21、15、57和66倍,B细胞增加的倍数分别为24、20、61和63倍,TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6及TLR10 mRNA表达变化不显著（P>0.05）;3.在1mg/ml黄芩苷作用下人T、B细胞TLR3、7、8和9 mRNA在12h时表达已开始增加,除T细胞的TLR7 mRNA表达在48h时略有下降外,其余表达基本一直持续增加,至48h到达峰值;4.人T、B细胞在被黄芩苷作用前使用鼠抗人TLR4单克隆抗体封闭,会显著降低黄芩苷对TLR3、7、8和9 mRNA表达的诱导作用（P<0.05）,使得T细胞增加倍数分别降为11、5、28和36倍,下降比率分别为47.6%、66.7%、50.9%和45.5%;B细胞增加的倍数分别降为12、11、30和31倍,下降比率分别为50.0%、45.0%、50.8%和50.8%。结论:1.黄芩苷在体外能显著促进T、B淋巴细胞增殖;2.人外周血T、B细胞组成性表达含量差异较大的TLR1-10mRNA,黄芩苷在体外可以显著上调人T、B淋巴细胞TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNA的表达,但对TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6及TLR10 mRNA没有影响;3.黄芩苷可能通过TLR4参与对人天然免疫能力的调节。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 前言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 主要材料
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 制备高纯度和高活性的T、B 细胞
• 2.2.2 采用UF-50 流式分析寻找最佳黄芩苷作用浓度
• 2.2.3 采用实时定量荧光 RT-PCR 分析在最佳黄芩苷作用浓度处理前后TLRs 的表达情况
• 2.2.4 通过受体抑制实验和实时定量荧光RT-PCR 探讨黄芩苷对TLRs 的调节机制
• 第3章 结果
• 3.1 流式分析确定最佳黄芩苷作用浓度
• 3.2 荧光定量RT-PCR 的熔解曲线和扩增曲线
• 3.3 黄芩苷对人T、B 细胞TLR1-TLR10 mRNA 表达的影响
• 3.4 黄芩苷对人T、B 细胞TLR3、7、8 和9 mRNA 表达的影响在不同时间点的变化
• 3.5 抗TLR4 单克隆抗体对黄芩苷上调人T、B 细胞TLR3、7、8 和9 mRNA表达的抑制
• 第4章 讨论
• 第5章 结论
• 第6章 参考文献
• 第7章 致谢
• 第8章 附录
• 第9章 个人简历