一、MMP-7在大肠癌中的研究进展（论文文献综述）
李秀[1]（2020）在《E-钙粘蛋白、β-连环素和基质金属蛋白酶-7在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义》文中提出目的:口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）是头颈部最常见的恶性肿瘤之一,恶性程度高,常出现糜烂、溃疡、出血及舌活动受限等临床症状,严重影响了患者的日常生活。E-钙粘蛋白（E-cadherin,E-cad）是一种钙依赖性跨膜糖蛋白,对维持正常上皮的极性和完整性起着重要作用,E-cad的低表达降低了同型细胞间的粘附力,促进了多种肿瘤的发生发展。β-连环素（β-catenin,β-cat）是一种多功能蛋白,是经典Wnt信号通路的关键效应分子,参与调节细胞的正常生长及分化,其异常表达可激活体内多数原癌基因,参与肿瘤的发生发展。E-cad功能的发挥离不开β-cat,两者必须形成E-cad/cat复合物才能发挥作用。基质金属蛋白酶-7（Matrix Metalloproteinase-7,MMP-7）是一种蛋白水解酶,可通过降解细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）以及基底膜大分子等方式来调节肿瘤的进展。MMP-7是Wnt/β-cat关键下游靶基因之一,并可水解E-cad的胞外结构,使之细胞间粘附功能丧失。E-cad、β-cat和MMP-7在多种肿瘤中可发生相互作用,共同介导肿瘤的发生发展,但关于三者在OSCC中的关系及其相关性研究,目前研究较少。本实验通过收集正常口腔黏膜组织、OSCC新鲜组织、OSCC癌旁组织和OSCC病理切片,采用实时定量聚合酶链反应PCR法（real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR）和免疫组织化学法（immunohistochemistry,IHC）和分别检测OSCC中E-cad、β-cat和MMP-7在基因水平和蛋白水平的表达,并分析三种蛋白的表达与患者临床病理参数的关系,探讨三者与OSCC发生发展的关系,为进一步明确OSCC的发生机制、诊断及治疗提供新的思路。方法:1.收集符合标准的新鲜OSCC组织、癌旁组织及正常口腔黏膜组织各6例,采用qRT-PCR法分别检测三种组织中E-cad、β-cat及MMP-7mRNA的表达;2.选取新鲜正常口腔黏膜组织10例和符合标准的低、中、高分化OSCC石蜡组织块各10例,共40例,苏木精-伊红染色法（hematoxylin and eosin,HE）染色后进行病理分级,采用免疫组化SP法检测正常口腔黏膜及OSCC中E-cad、β-cat及MMP-7蛋白的表达量,并分析三者与患者临床病理参数的关系。结果:1.qRT-PCR结果:E-cad和β-cat mRNA的相对表达量在正常组最高;与正常组相比,OSCC组中两者的相对表达量依次下调0.58倍和0.76倍,癌旁组中则依次下调0.68倍和0.53倍,差异均具有统计学意义（P<0.05）;癌旁组与OSCC组相比较,两者mRNA的表达差异均无统计学意义（P>0.05）。MMP-7 mRNA在正常组中呈阴性表达,在鳞癌组及癌旁组中均呈强阳性表达,且癌旁组最高（与鳞癌组相比,上调6.90倍）,两组间表达差异有统计学意义（P<0.05）;2.HE染色结果:对正常口腔黏膜组织及所选OSCC蜡块行常规HE染色,由两位资深病理科医师对组织切片复片,确定为正常口腔黏膜组织及高、中、低分化OSCC各10例;3.IHC染色结果:正常口腔黏膜组织中,E-cad和β-cat在上皮细胞的胞膜上呈阳性表达,MMP-7呈阴性表达。随着OSCC分化程度的降低,E-cad在胞膜上表达逐渐下调甚至缺失;β-cat在胞膜上表达逐渐减弱甚至缺失,并逐渐出现胞质或胞核中表达;MMP-7在胞质内表达水平逐渐上调。三种蛋白的表达在四组间比较,差异均具有统计学意义（P<0.05）,且均与OSCC分化程度相关（P<0.05）;4.三种蛋白的表达与患者临床病理参数的关系:在OSCC中,E-cad在无淋巴结转移组和无浸润组中的表达均较高,差异均具有统计学意义（P<0.05）;而在患者年龄、性别、吸烟饮酒、肿瘤大小、临床分期以及复发率（随访3-30月）各组中的表达差异均无统计学意义（P>0.05）。β-cat和MMP-7分别在各组中的表达差异均无统计学意义（P>0.05）。结论:在OSCC中,E-cad、β-cat和MMP-7的表达与OSCC分化程度密切相关,三者在OSCC进程中可能发挥一定的协同作用,共同促进OSCC的发生发展。
王哲[2]（2020）在《FOXP3促进结直肠癌肝转移的机制研究》文中指出目的:结直肠癌是国内外常见的恶性肿瘤之一,其发病率逐年升高。在我国结直肠癌发病率居第四位,死亡率居第四位。2018全球癌症年报显示结直肠癌发病率10.2%,在全球新发癌症发病率中排第三。远处转移是结直肠癌患者治疗失败的主要原因。肝脏是血行转移最主要的靶器官,约20%-34%的患者在临床确诊时已有肝转移。结直肠癌肝转移也是结直肠癌患者最主要的死亡原因。目前肝转移发生的机制尚不清楚,早期检测有意义的生物标志物是改善结直肠癌患者生存的关键。因此,从基因水平寻找与结直肠癌肝转移有关的一系列变化,探讨结直肠癌肝转移发生、发展的分子机制,对改善结直肠癌肝转移患者的预后,并找到有效治的治疗靶点极为重要。FOXP3（Forkhead Box P3）是一种转录因子。已经发现FOXP3是调节性T细胞（Tregs）的重要标志基因,参与精确调控Tregs细胞的发展和功能。但是,最近的研究发现FOXP3基因在多种肿瘤细胞中表达。提示FOXP3可能参与肿瘤细胞的发生发展。目前在肠癌细胞中FOXP3表达及发挥的功能和机制还不清楚,相关的生物学行为仍不明确。本研究中,我们旨在探讨FOXP3在肠癌组织及肝转移组织中的表达、功能及其参与调控肠癌肝转移的机制,为肠癌肝转移患者的预后预测和治疗提供新的策略。研究方法:1、采用免疫组化技术检测癌旁组织、肠癌组织及肝转移组织中FOXP3蛋白的表达;2、应用TCGA（The Cancer Genome Atlas）及GEO（Gene Expression Omnibus）数据库及本中心临床随访数据分析FOXP3表达与肠癌患者临床病理参数间的关系;3、转染si RNA建立FOXP3敲减的瞬转细胞株;4、慢病毒转染沉默及过表达FOXP3建立稳转细胞株;5、采用CCK8实验检测细胞增殖能力;6、采用流式技术检测细胞周期变化;7、采用Transwell法测定细胞迁移和侵袭能力;8、采用免疫共沉淀法检测蛋白质相互结;9、采用非靶代谢质谱分析FOXP3影响细胞代谢小分子的改变;10?采用荧光素酶实验、PCR、Western bolt检测Wnt信号通路激活;11、采用免疫荧光实验检测β-连环蛋白（β-catenin）入核变化;12、采用裸鼠肠癌肝转移瘤模型进行体内研究;13、统计学分析:采用R软件及Graphpad统计软件进行统计学分析。所有实验结果均重复3次,并以均值±标准差（x±s）表示。P<0.05认为有统计学意义。结果:1、FOXP3在肠癌组织及肝转移组织中高表达。临床病理资料回顾分析显示,FOXP3的高表达与淋巴结转移、TNM分期及同时性（或异时性）肝转移相关。2、GEO及TCGA数据库分析结果表明,FOXP3在结直肠癌中的表达与KRAS（V-Ki-ras2 Kirsten ratsarcoma viral oncogene homolog）突变状态、微卫星不稳定性（Microsatellite instability,MSI）显着相关,而与（V-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1）BRAF突变状态不相关。3、FOXP3促进肠癌细胞体内增殖。细胞增殖-毒性检测实验CCK8提示,沉默FOXP3后肿瘤细胞增殖能力降低,过表达FOXP3后其增殖能力升高。4、FOXP3促进肠癌细胞侵袭及迁移能力。Transwell实验结果提示,沉默FOXP3后,RKO及HT29细胞迁移及侵袭能力减弱,过表达FOXP3后细胞迁移及侵袭能力增强。5、体内研究证明裸鼠体内FOXP3促进肠癌细胞增殖。应用慢病毒过表达及敲减RKO细胞中FOXP3的表达水平,裸鼠腋窝皮下注射,28天后,沉默FOXP3组裸鼠腋窝处皮下肿瘤体积明显小于对照组小鼠,而过表达组肿瘤体积较对照组增大。4、体内研究证明裸鼠体内FOXP3促进肠癌细肝转移。免疫荧光、qPCR及Western blot充分验证利用慢病毒转染RKO细胞中过表达及沉默FOXP3的效率后,裸鼠尾静脉注射肿瘤细胞,过表组肝转移瘤较对照组明显增多,而沉默组较对照组肝转移瘤减少。8、FOXP3促进肠癌细胞上皮细胞-间充质转化。qPCR及免疫印迹实验结果显示,沉默FOXP3后E-cadherin、N-cadherin、Snail、MMP-9的mRNA表达水平下降,过表达FOXP3后E-cadherin、N-cadherin、Snail、MMP-9的表达水平上升。9、FOXP3促进β-catenin入核。免疫荧光实验结果显示在肠癌细胞中过表达FOXP3后,增多的β-catenin主要定位在核中,提示FOXP3促进β-catenin入核。10、FOXP3与TCF4直接结合共激活Wnt信号通路。GSEA分析提示FOXP3升高后Wnt/β-catenin信号通路显着激活。双荧光素酶报告基因实验验证FOXP3激活Wnt/β-catenin信号通路。免疫共沉淀实验证实FOXP3与TCF4直接结合。QPCR及免疫印迹实验证明过表达FOXP3促进Cyclin D1、C-myc表达增高。反之,敲减FOXP3后Cyclin D1、C-myc表达下调。11、过表达FOXP3同时沉默TCF4逆转FOXP3促进细胞侵袭、迁移的作用。Treswell实验结果显示,过表达FOXP3后细胞侵袭能力上升,同时用siRNA沉默TCF4后,较FOXP3过表达组比较,细胞侵袭能力下降。12、过表达FOXP3同时沉默TCL4逆转FOXP3上调E-cadherin、N-cadherin、Snail、MMP-9、Cyclin D1及C-myc的表达。13、FOXP3抑制甲硫氨酸循环循（S-adenosyl methionine,SAM）,减低MMP9启动子甲基化,促进MMP9表达。非靶代谢组学分析提示:FOXP3沉默后,对SAM循环的抑制减低,相关代谢产物增加,提示FOXP3抑制SAM循环;QPCR及免疫印迹实验证明FOXP3抑制SAM循环呈浓度依赖性,SAM循环抑制后减低MMP9启动子甲基化,促进MMP9表达,进而参与调控肠癌细胞的代谢重编程,促进肠癌肝转移。结论:FOXP3在肠癌及肝转移组织中高表达发挥癌基因的功能,促进肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移;FOXP3的表达与肠癌分期、同时性肝转移的发生、KRAS突变以及MSI-H（dMMR）状态相关;FOXP3促进肠癌细胞上皮-间充质转化,通过促进β-catenin入核并于TCF4直接结合形成转录共刺激因子,激活经典的Wnt/β-catenin信号通路促进肠癌肝转移;FOXP3通过影响甲硫氨酸循环的SAM代谢促进MMP9表达,进而促进肠癌肝转移的发生。
刘鼎盛[3]（2020）在《MiR-425-5p通过调控CTNND1促进结直肠癌增殖和转移的研究》文中研究指明目的:结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是一种在结肠和直肠组织中形成恶性肿瘤的疾病。CRC是全球第三大常见的恶性肿瘤,并且是癌症相关死亡的第四大主要原因。根据对CRC患者的检测报道,2018年全球约有1,800,977例新发病例和861,663例死亡病例。在临床治疗手段中,CRC患者的治疗方案包括手术切除、靶向治疗、化学疗法、放射疗法以及免疫疗法等。尽管近几十年来在临床治疗方面取得了显着进步,并延长了患者的生存期,但国内CRC患者近5年生存率（约57%）仍不尽人意。因此,进一步确定CRC的治疗策略和靶标是目前研究所必须的。近期研究发现,microRNA（miRNA）在多种人类疾病（包括癌症）的发生发展中发挥巨大作用。其中位于人类3号染色体上的miR-425-5p被发现在胃癌、宫颈癌和肝细胞癌等多种恶性肿瘤中高表达。然而,miR-425-5p在CRC中的功能和潜在的作用机制并不清楚。为此,本研究拟明确miR-425-5p对CRC细胞生物学行为的影响,并进一步阐明其潜在的分子机制。方法:在本研究中,收集了30例结直肠癌患者和30例健康对照者外周血,24例结直肠癌组织和癌旁组织,实时定量PCR（qRT-PCR）检测结直肠癌患者和健康对照者外周血中miR-425-5p表达水平以及结直肠癌组织和癌旁组织中miR-425-5p和CTNND1表达水平。培养LOVO和SW480两种CRC细胞系进行体外实验。通过构建miR-425-5p模拟物和miR-425-5p抑制剂来对LOVO和SW480细胞中miR-425-5p的表达水平进行调控,并通过qRT-PCR确定miR-425-5p在细胞中的相对表达。通过CCK-8试剂盒检测细胞活力。采用AnnexinV-FITC/PI对细胞进行染色后,通过流式细胞仪对细胞凋亡和细胞周期分布进行定量分析。采用划痕实验和Transwell实验检测CRC细胞迁移和侵袭能力。使用qRT-PCR,蛋白质印迹和免疫荧光（IF）检测细胞中上皮-间质转化（EMT）相关基因、β-catenin、c-myc、Cyclin D1、MMP-7和CTNND1的相对表达水平。用双荧光素酶报告基因检测来确定miR-425-5p和CTNND1之间的靶向关系。通过构建CRC异种移植小鼠模型检测miR-425-5p inhibitor在体内的抗肿瘤活性。结果:结果表明,结直肠癌患者血清中miR-425-5p的水平明显高于健康对照组（P<0.05）,且结直肠癌肿瘤组织中miR-425-5p表达水平显着高于癌旁对照组织（P<0.01）。与癌旁组织相比,CTNND1在结直肠癌组织中明显降低（P<0.05）。miR-425-5p mimic可以显着上调CRC细胞中的miR-425-5p表达水平（P<0.001）,而miR-425-5p inhibitor则显着降低其表达（P<0.001）。此外,与对照组相比,在CRC细胞中过表达miR-425-5p后显着上调CRC细胞增殖活力（P<0.001）;而敲减mi R-425-5p后显着抑制CRC细胞的增殖（P<0.001）。过表达miR-425-5p增加了细胞S期和G2/M期水平（P<0.05,P<0.01）,减少G0/G1期水平（P<0.001）,显着促进细胞周期进程。我们的结果还证明,敲减miR-425-5p可显着抑制CRC细胞的迁移（P<0.01）和侵袭（P<0.01）能力。此外,过表达miR-425-5p显着上调间充质标记物（Fibronectin,N-cadherin,and Vimentin）表达（P<0.001）,并抑制上皮标志物（E-cadherin）的表达（P<0.001）,促进CRC细胞的EMT过程。同样,IF结果也证实过表达miR-425-5p上调了细胞中纤连蛋白的表达,而敲减miR-425-5p则抑制其表达。此外,miR-425-5p的上调也增强了β-catenin在核中的分布（P<0.001）,同时降低了其在细胞质中的表达水平（P<0.001）。Western blotting结果表明,过表达miR-425-5p可以促进c-myc、Cyclin D1和MMP-7的表达水平（P<0.001）,而敲减miR-425-5p则抑制它们的表达。用mi RNA数据库发现,CTNND1是miR-425-5p的下游潜在靶基因。在miR-425-5p模拟物和CTNND1-wt共转染的CRC细胞中,荧光素酶活性显着降低,证实了miR-425-5p与CTNND1之间的靶标关系（P<0.001）。而miR-425-5p模拟物和CTNND1-mut的共转染对萤光素酶活性的影响很小。此外,研究还发现miR-425-5p与CTNND1 mRNA和蛋白质水平之间呈负相关（P<0.001）。综上,本研究结果表明,miR-425-5p通过负调控CTNND1来影响CRC细胞增殖、周期、迁移、侵袭和EMT。当同时敲减miR-425-5p和CTNND1时可以显着促进CRC细胞增殖（P<0.01）、周期（P<0.001）、迁移（P<0.05）、侵袭（P<0.01）和EMT（P<0.001）。体内结果与体外结果一致,当在小鼠异种移植肿瘤模型中敲减miR-425-5p后可以显着抑制体内肿瘤体积（P<0.001）和肝转移结节数量（P<0.01）。结论:本研究结果表明,在CRC组织中,mi R-425-5p过度表达,而CTNND1表达水平降低。敲减miR-425-5p显着下调细胞核内β-catenin以及c-myc、Cyclin D1和MMP-7的表达,抑制CRC细胞增殖、周期、转移和EMT。实验进一步证实,miR-425-5p可通过靶向负向调控CTNND1的表达来促进CRC的发展进程。本研究结果为miR-425-5p作为CRC的潜在治疗靶点提供了理论依据。
佟鑫[4]（2020）在《ACBP通过Wnt/β-catenin信号通路抑制结直肠癌细胞增殖》文中研究表明目的:结直肠癌是我国最常见的消化道系统的恶性肿瘤。近些年发病率及死亡率在各个地区有逐年上升趋势。目前结直肠癌的治疗仍以手术为主,但预后较差,因此急需寻找新的治疗方法。抗癌活性肽（anti-cancer bioactive peptide,ACBP）是生物活性肽的一种,在我们既往的研究结果表明,ACBP不仅能有效地抑制多种癌症,并发现ACBP能够抑制结直肠癌HCT116细胞的增殖,这为我们寻找结直肠癌的治疗方法提供了新思路。本课题拟深入研究ACBP对结直肠癌细胞作用的分子机制。方法:收集内蒙古医科大学附属医院2018年6月到12月接受结直肠癌根治术的患者对应的正常结直肠组织、及原发性结直肠癌组织各10例。选取结直肠癌细胞系HCT116、RKO、HT29细胞来进行体外研究。采用平板克隆实验及MTT实验研究不同浓度ACBP对结直肠癌细胞克隆形成能力及细胞增殖能力的影响;采用划痕实验和Transwell侵袭实验研究ACBP对结直肠癌细胞的迁移和侵袭的影响。为进一步探讨ACBP抑制结直肠癌细胞增殖的分子机制,我们对ACBP作用后的结直肠癌HCT116细胞进行RNA-Seq以及生物信息学分析,得到差异表达基因谱及通路富集图,分析ACBP作用于结直肠癌细胞系的信号通路。随后我们对Wnt通路的多个靶蛋白进行蛋白质免疫印迹分析,检测不同浓度ACBP对靶蛋白的影响。最后通过检测Wnt通路关键蛋白β-catenin的表达进一步研究ACBP对结直肠癌细胞系发挥作用的位点。实验资料应用SPSS19.0统计软件进行统计学分析,计量资料采用单因素方差分析,组间比较采用独立样本t检验（Student’st text）,P<0.05差异具有统计学意义。结果:ACBP影响结直肠癌细胞的克隆形成能力及细胞增殖能力,并随剂量的增加,抑制作用更明显;ACBP能够抑制结直肠癌细胞的迁移和侵袭作用;ACBP影响磷酸化β-catenin的表达,使其呈剂量依赖性升高,对Wnt通路的多个靶蛋白CycD1、Met、c-myc的表达发挥剂量依赖性抑制作用,提示ACBP抑制结直肠癌细胞增殖的靶点。结论:在本实验中,我们发现ACBP可以抑制结直肠癌细胞系HCT116、RKO、HT29的增殖、迁移及侵袭能力,并随ACBP作用浓度的增加,抑制作用更加明显。我们还发现ACBP是通过Wnt通路对结直肠癌细胞发挥抑制作用。在不同浓度的ACBP作用下,磷酸化β-catenin（P-β-catenin）的表达随ACBP作用浓度的增加,出现明显的剂量依赖性上调。β-catenin磷酸化后被蛋白酶体降解,减少了细胞质中β-catenin的积聚,使进入细胞核中的β-catenin减少,下调下游靶蛋白CycD1、Met、c-myc的表达,这充分的解释了ACBP对结直肠癌细胞增殖的抑制现象。综上所述,我们的实验结果表明ACBP可以通过Wnt/β-catenin信号通路促进β-catenin的降解抑制结直肠癌细胞的增殖。
高旭灿[5]（2020）在《岩白菜素通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对结肠癌细胞生物学行为的影响及作用机制研究》文中进行了进一步梳理目的:结直肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,其相关信号通路一直是结直肠癌发病机制研究的重点。本研究拟探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路对结肠癌细胞增殖、凋亡、周期等行为的影响,以及岩白菜素通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对结直肠癌的抑制作用及机制。研究结果有助于寻找PI3K/AKT/mTOR信号通路上关键因子有调控作用的药物,可能对结直肠癌的治疗带来深远影响。方法:以45例结直肠癌确诊患者为研究对象,检测手术切除标本癌组织和正常组织中PI3K、AKT、mTOR的表达水平,分析PI3K、AKT、mTOR水平与患者各临床及病理特征的关系。用不同浓度的岩白菜素处理结肠癌HCT116细胞,检测AKT、mTOR的表达和细胞存活、凋亡、周期等变化;观察岩白菜素对裸鼠成瘤的影响。结果:1.人结直肠癌组织中PI3K、AKT和mTOR mRNA水平分别为正常组织的（1.785±0.21）、（1.647±0.25）和（1.985±0.19）倍（p 均<0.01）;PI3K、AKT 和 mTOR蛋白在癌组织表达水平均高于正常组织（P<0.05）。2.人结直肠癌组织中PI3K、mTOR表达水平与患者的TNM分期、分化程度、肿瘤病灶大小和有无有淋巴结或远端转移有关;AKT表达水平与TNM分期、有无有淋巴结或远端转移有关。3.岩白菜素3 μM组、10 μM组和30 μM组细胞增殖率与对照组相比有显着差异（p<0.01）;10 μM组和30 μM组细胞凋亡率与对照组相比有统计学差异（p<0.05,p<0.01）;10 μM组、30μM组G0/G1期细胞所占比例与对照组相比有显着差异（p<0.01）。4.岩白菜素10 μM组、30 μM组p-H2AX蛋白表达与对照组相比有统计学差异（p<0.05,p<0.01）。5.岩白菜素10 μM组、30 μM组ROS水平与对照组相比有统计学差异（p<0.05）,30 μM岩白菜素+5 mMNAC组细胞ROS水平较30μM组显着降低（p<0.01）,与对照组无差异（p>0.05）。6.岩白菜素能剂量依赖地抑制结肠癌细胞中p-AKT和p-mTOR蛋白表达。7.岩白菜素组移植瘤平均质量为（1.77±0.43）g,平均体积为（145±28.12）mm3,低于对照组的（2.41 ± 0.21）g 和（244.91±28.4）mm3（p 均<0.01）。岩白菜素组瘤质量抑制率为26.56%,瘤体积抑制率40.13%。8.岩白菜素组裸鼠移植瘤组织中总AKT和mTOR mRNA水平与对照组无差异（p>0.05）;但岩白菜素组裸鼠移植瘤组织中p-AKT和p-mTOR蛋白水平是对照组的（0.69±0.09）和（0.62±0.10）倍（p<0.05）。结论:岩白菜素对PI3K/AKT/mTOR信号通路有抑制作用,能抑制结肠癌细胞的增殖、促进细胞凋亡、抑制细胞周期进展、诱导DNA断裂损伤和氧化应激损伤,从而发挥其抗肿瘤作用。
楚硕[6]（2020）在《通过生物信息学的方法对大肠癌的核心基因预测与验证》文中指出背景:大肠癌是世界上发病率最高的三大癌症之一,在所有癌症中死亡率居于第二位。预计到2030年,全球结直肠癌负担将增加60%,新增病例>220万,死亡110万。大肠癌的早期症状不典型,经常被漏诊或误诊,通常在中晚期被发现。大肠癌常用的早期检测方法包括粪便检查,血液检查和肠镜检查。但是,在经济欠发达的地区可能无法完善相关检测,检出率相对更低。结直肠癌的主要的治疗方法包括:外科手术,新辅助放疗（直肠癌）,辅助化疗（为III/IV期和高风险的II期大肠癌）,和分子靶向药物治疗。但是,这些治疗方法都有一定的缺陷。因此,探究新的生物标记物对了解促进结直肠癌发生、发展的分子机制,以期实现结直肠癌的早期诊断和新靶标治疗至关重要。目的:采用生物信息学方法探究大肠癌的发病机制,为大肠癌的防治提供生物信息学依据。方法:用GEO2R在线工具分析GSE110224、GSE113513、GSE126092中大肠癌组织和癌旁组织的差异表达基因（Differentially expressed genes,DEGs）,通过Draw Venn Diagram在线工具对三个数据集取交集,通过DAVID数据库对DEGs进行GO分析和KEGG通路富集分析,然后通过STRING数据库构建蛋白质相互作用网络,用Cytoscape软件进行关键基因（Hub基因）筛选和功能模块分析,并在GEPIA数据库对Hub基因进行验证及相关性分析,用Target Scan数据库预测调控靶基因的micro RNAs,并用OncomiR分析micro RNAs在大肠癌组织中的表达及其与生存预后的关系。GSE110224、GSE113513、GSE126092（以|log FC|>1且P<0.05）分别筛选出1236、2919、2659个在大肠癌与癌旁组织中差异表达的基因,用在线工具draw venn diagram对GSE110224、GSE113513、GSE126092差异表达基因取交集发现234个在三组数据中都存在的差异表达基因,其中139个上调基因,95个下调基因。其中139个上调基因功能分析主要涉及细胞粘附细胞对缺氧的反应、转化生长因子β受体信号通路的正调控、PI3K-Akt信号通路、癌症中的转录失调、MAPK信号通路等过程。95个下调基因功能分析显示,主要富集在一下生物学过程胶原分解代谢过程、细胞增殖、有丝分裂细胞周期的G2/M转换、p53信号通路、细胞因子-细胞因子-受体相互作用。蛋白质互作网络筛选出59（24个上调基因、35个下调基因）个Hub基因。GEPIA数据库验证显示其中的10个基因（SCG2、NR3C2、AURKA、CCNA2、CCNB1、CHRDL1、CLCA1、COL8A1、CXCL2、ZG16）与大肠癌患者的不良预后有关。其中3个基因（SCG2、CCNB1、CCNA2）与大肠癌的分期有关,并且在大肠癌中具有相关性。miR-802与SCG2 m RNA的3’UTR结合。与正常组织相比,miR-802在大肠癌组织中表达下调,且与大肠癌患者不良预后具相关性。结论:我们通过生物信息学方法研究确定了与大肠癌增殖和预后相关的核心基因SCG2、NR3C2、AURKA、CCNA2、CCNB1、CHRDL1、CLCA1、COL8A1、CXCL2、ZG16;SCG2可能与CCNB1、CCNA2相互作用共同影响大肠癌的进展;进一步研究结果表明miR-802通过靶向SCG2抑制大肠癌的增殖和进展。我们的发现增加了我们对结直肠癌发展的分子机制的了解,并可能有助于发展大肠癌的早期诊断和确定治疗结直肠癌的靶标。
林秀敏[7]（2020）在《PDLIM5及BCAT1在非小细胞肺癌中的作用及分子机制》文中研究说明目的:肺癌的发病率和死亡率位居世界首位。2018年全球有约210万例新增肺癌病例和176万例肺癌死亡病例,肺癌死亡病例大约占癌症死亡病例的五分之一（18.4%）[1]。非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌中最常见的组织学类型。近年来NSCLC晚期患者得益于吉非替尼和厄洛替尼（erlotinib）等靶向药物,其生存时间和生存质量均得到改善。尽管如此,仍然需要对肺癌的发生发展机制进行深入研究,发现更多的早期诊断方法以及靶向治疗药物。PDLIM5是PDZ-LIM蛋白家族中的一员,其氨基端含有一个PDZ结构域,羧基端含有3个LIM结构域。PDZ和LIM结构域介导蛋白之间的相互作用。已有研究证实PDLIM5调控膜相关蛋白和细胞骨架蛋白的信号转导过程[2-4]。PDLIM5在乳腺癌,胃癌和前列腺癌等肿瘤中异常表达并调控肿瘤的进展[5-8]。但是PDLIM5在NSCLC中的作用机制尚未报道。支链氨基酸转移酶（branched-chain amino acid transaminases,BCATs）能够催化支链氨基酸的转氨基反应,并使其转化为支链α-丙酮酸盐和谷氨酸盐[9]。BCATs包含两个重要的同工酶,分别为细胞质支链氨基酸转移酶（BCTA1）以及线粒体支链氨基酸转移酶（BCAT2）[10]。二者在许多肿瘤中均有发现。有文献报道,BCAT1在肝癌,乳腺癌和宫颈癌等癌症细胞中表达上调,并促进肿瘤细胞的增殖和侵袭[11-13]。但是BCAT1在肺癌中的作用机制尚不明确。在本次研究中我们将探究PDLIM5和BCAT1在肺癌组织及正常肺泡组织中表达含量,并分析其在肺癌中的临床意义。并就PDLIM5和BCAT1对肺癌细胞生物学功能的影响以及潜在的分子生物学机制进行进一步研究。研究方法:免疫组化检测人类肺癌组织及肺正常组织中PDLIM5和BCAT1表达情况,并分析临床意义。获取来自Oncomine和TCGA的数据,分析PDLIM5和BCAT1在肺正常组织以及肺癌组织中mRNA表达量变化和患者生存率等信息。MTT实验和集落形成实验检测PDLIM5和BCAT1表达差异对NSCLC细胞增殖能力影响。Transwell凝胶侵袭实验检测PDLIM5和BCAT1表达差异对NSCLC细胞侵袭能力影响。流式细胞凋亡实验检测PDLIM5表达差异对erlotinib诱导的NSCLC细胞凋亡情况的影响。RT-PCR和Western blot实验检测正常肺泡上皮细胞以及NSCLC细胞中PDLIM5和BCAT1的表达差异。分析PDLIM5表达差异对增殖相关蛋白和Hippo信号通路相关指标表达的影响,以及BCAT1表达差异对Wnt信号通路及其下游指标表达的影响。统计分析采用SPSS 16.0软件。通过Kaplan-Meier法绘制患者的生存曲线,两组生存曲线差异间比较应用Log-rank检验法。实验组与对照组数据均采用Student’s t-test检验方法进行分析。P<0.05表示存在统计学意义。结果:1.免疫组化结果显示与正常组织相比PDLIM5表达量在肺癌中显着提高。肺癌患者中PDLIM5表达量与患者高TNM分期（p=0.002）,高T分级（p=0.0013）以及淋巴结转移（p=0.001）显着相关。Western blot结果显示PDLIM5在NSCLC细胞中表达水平显着高于正常细胞。MTT及集落形成实验结果显示PDLIM5促进NSCLC增殖和集落形成。流式凋亡结果显示,PDLIM5抑制erlotinib诱导的NSCLC细胞凋亡。Transwell凝胶侵袭实验结果显示,PDLIM5显着提高NSCLC侵袭能力。PDLIM5表达水平改变后,通过Western blot检测cyclin E,p21,YAP,TAZ,LATS1和p-LATS1蛋白水平变化。结果显示PDLIM5上调后cyclin E,YAP,TAZ表达水平显着上调,p21和p-LATS1表达水平显着下调。反之亦然。2.免疫组化结果显示BCAT1在肺癌组织中高表达。在肺癌患者中BCAT1表达量与患者高TNM分期（p=0.0149）和淋巴结转移（p=0.0172）显着相关。Western blot和RT-PCR结果显示BCAT1在NSCLC细胞中表达水平显着高于肺泡正常上皮细胞。MTT及集落形成实验结果显示,BCAT1显着提高NSCLC增殖和集落形成能力。Transwell凝胶侵袭实验结果显示,BCAT1显着提高NSCLC侵袭能力。BCAT1表达水平改变后,通过Western blot检测Wnt信号通路下游靶基因蛋白水平变化。实验结果显示,上调BCAT1表达含量后cyclin D1,c-myc,MMP7和active-β-catenin表达上调;p27,E-cadherin和p-β-catenin表达下调。BCAT1下调结果与此相反。结论:PDLIM5促进NSCLC增殖和侵袭;PDLIM5抑制由erlotinib的NSCLC细胞凋亡;PDLIM5抑制Hippo通路并调控cyclin E,p21,YAP,TAZ,LATS1等下游靶基因表达。BCAT1促进NSCLC细胞增殖和侵袭;BCAT1激活Wnt信号通路并调控cyclin D1,c-myc,MMP7和β-catenin等基因表达。
黄艳洁[8]（2020）在《miR-15a-5p通过Wnt/β-catenin通路调控大肠癌多药耐药的研究》文中研究说明大肠癌（colorectal cancer,CRC）是常见的消化道恶性肿瘤,目前临床上治疗中晚期大肠癌仍以化疗作为辅助手术治疗的主要手段,但由于肿瘤多药耐药的发生,常常会影响化疗疗效,因此寻找化疗药物的耐药靶点是提高大肠癌临床治疗效果的关键。多药耐药是指肿瘤细胞不仅对一种药物产生耐药性,而且对作用机制和化学分子结构均不同的其他药物也产生交叉耐药。肿瘤产生多药耐药的重要原因之一是由于多药耐药基因1（multidrug resistance 1 gene,MDR1）编码的P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）的过度表达,P-gp是三磷酸腺苷结合盒式（ATP-binding cassette,ABC）结构转运蛋白超家族中的一员,可以利用ATP水解释放的能量,在化疗药物尚未发挥细胞毒性作用时就将其泵出到细胞外,从而导致肿瘤细胞产生耐药性。大量研究发现,Wnt/β-catenin信号通路的异常激活可参与调节多种肿瘤的多药耐药,并且发现Wnt/β-catenin信号通路可以通过调控P-gp的表达从而影响肿瘤的多药耐药。micro RNA是一类非编码小分子单链RNA,可以调控靶基因的表达。其中miR-15a-5p是miR-15家族的成员,近年来研究表明其可以通过靶向结合多种编码基因m RNA的3’UTR,抑制靶m RNA的翻译或促进靶m RNA的降解,对基因进行转录后调控。但目前关于miR-15a-5p在大肠癌中的表达情况及与大肠癌多药耐药的关系鲜见报道。本研究旨在探讨miR-15a-5p在大肠癌中的表达情况以及在大肠癌多药耐药中的作用机制。目的:在组织水平检测miR-15a-5p与P-gp在大肠癌组织中的表达情况并分析二者的相关性。在细胞水平研究miR-15a-5p对Wnt/β-catenin信号通路中的关键蛋白Wnt3a、β-catenin及P-gp表达的影响,探讨miR-15a-5p在大肠癌多药耐药中的调节作用及机制。方法:1.通过实时荧光定量PCR法检测miR-15a-5p和MDR1 m RNA在大肠癌组织和癌旁正常肠黏膜组织中的表达情况,并分析miR-15a-5p和MDR1 m RNA在大肠癌组织中表达的相关性。2.通过实时荧光定量PCR法检测miR-15a-5p在大肠癌细胞HCT-116及大肠癌耐药细胞HCT-116/LOHP细胞中表达情况。3.通过Western blot实验检测Wnt3a、β-catenin、P-gp在大肠癌细胞HCT-116及大肠癌耐药细胞HCT-116/LOHP细胞中表达情况。4.通过细胞转染,将HCT-116/LOHP细胞分为五组:空白对照组、转染miR-15a-5p mimics NC的对照组、转染miR-15a-5p mimics的实验组、转染miR-15a-5p inhibitor NC的对照组、转染miR-15a-5p inhibitor的实验组,通过实时荧光定量PCR法检测miR-15a-5p的表达,MTT实验检测各组细胞在不同浓度奥沙利铂下的增殖情况并计算其生长抑制率、半数抑制浓度(IC50)以及耐药指数（RI）。5.通过实时荧光定量PCR法检测转染后各组Wnt3a、β-catenin、MDR1m RNA的表达情况,通过Western blot实验检测转染后各组Wnt3a、β-catenin、P-gp的表达情况。结果1组织水平1.1 miR-15a-5p及MDR1 m RNA在大肠癌组织与癌旁正常肠黏膜组织的表达情况miR-15a-5p在大肠癌组织中的表达量为0.51（0.25）,明显低于癌旁正常肠黏膜组织1.17（2.95）。MDR1 m RNA在大肠癌组织中的表达量为2.21（4.07）,明显高于癌旁正常肠黏膜组织1.13（2.28）,（P均<0.05）。1.2大肠癌组织中miR-15a-5p表达与MDR1 m RNA表达的相关性Spearman相关分析显示,大肠癌组织miR-15a-5p表达与MDR1m RNA表达呈负相关关系（r=-0.343,P<0.05）。2细胞水平2.1 MTT实验验证HCT-116/LOHP细胞对奥沙利铂的耐药奥沙利铂对HCT-116细胞和HCT-116/LOHP细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为（13.51±2.62）μg/ml和（103.08±12.29）μg/ml（P<0.01）,计算得出耐药指数RI为7.63。2.2实时荧光定量PCR检测miR-15a-5p在HCT-116细胞和HCT-116/L-OHP细胞中的相对表达量分别为1.00±0.00和0.16±0.05,差异有统计学意义（P<0.01）。2.3 Western blot实验检测HCT-116/LOHP细胞中Wnt3a、β-catenin及P-gp的相对表达量均高于HCT-116细胞,差异有统计学意义（P<0.05）。2.4实时荧光定量PCR检测转染后各组miR-15a-5p的表达情况,空白对照组、转染miR-15a-5p mimics NC的对照组、转染miR-15a-5p mimics的实验组、转染miR-15a-5p inhibitor NC的对照组、转染miR-15a-5p inhibitor的实验组中miR-15a-5p的相对表达量分别为1.00±0.00、1.08±0.10、277.01±20.81、1.07±0.12和0.38±0.04。转染miR-15a-5p mimics组HCT-116/LOHP细胞中miR-15a-5p的相对表达量明显升高（F=527.82,P<0.001）,转染miR-15a-5p inhibitor组HCT-116/LOHP细胞中miR-15a-5p的相对表达量明显下降（F=79.93,P<0.001）。2.5 MTT实验检测转染后各组细胞对奥沙利铂的耐药情况,奥沙利铂对miR-15a-5p mimics NC对照组的半数抑制浓度(IC50)为（100.35±10.57）μg/ml,miR-15a-5p mimics实验组为（40.78±2.47）μg/ml,差异有统计学意义（P<0.01）。奥沙利铂对miR-15a-5p inhibitor NC对照组半数抑制浓度(IC50)为（102.08±5.95）μg/ml,miR-15a-5p inhibitor实验组为（132.77±7.97）μg/ml,差异有统计学意义（P<0.01）。奥沙利铂对空白对照组的半数抑制浓度(IC50)为（99.98±2.63）μg/ml,空白对照组与阴性对照组HCT-116/LOHP细胞的差异均无统计学意义（P均>0.05）。2.6通过Western blot实验发现,HCT-116/LOHP细胞转染miR-15a-5p mimics实验组与转染miR-15a-5p mimics NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与P-gp表达均降低（P<0.05）,空白对照组与转染miR-15a-5p mimics NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与P-gp表达均无明显变化（P>0.05）。2.7通过Western blot实验发现,HCT-116/LOHP细胞转染miR-15a-5p inhibitor实验组与转染miR-15a-5p inhibitor NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与P-gp表达均升高（P<0.05）,空白对照组与转染miR-15a-5p inhibitor NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与P-gp表达均无明显变化（P>0.05）。2.8实时荧光定量PCR法检测结果显示HCT-116/LOHP细胞转染miR-15a-5p mimics实验组与转染miR-15a-5p mimics NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与MDR1m RNA表达均降低（P<0.05）,空白对照组与转染miR-15a-5p mimics NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与MDR1m RNA表达均无明显变化（P>0.05）。2.9实时荧光定量PCR法检测结果显示HCT-116/LOHP细胞转染miR-15a-5p inhibitor实验组与转染miR-15a-5p inhibitor NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与MDR1m RNA表达均升高（P<0.05）,空白对照组与转染miR-15a-5p inhibitor NC对照组相比Wnt3a、β-catenin与MDR1m RNA表达均无明显变化（P>0.05）。结论:1.miR-15a-5p在大肠癌组织中低表达,MDR1在大肠癌组织中高表达,并在组织水平证明二者表达呈负相关关系。2.miR-15a-5p在大肠癌耐药细胞HCT-116/LOHP中的表达水平明显低于敏感细胞HCT-116,Wnt3a、β-catenin及P-gp在大肠癌耐药细胞HCT-116/LOHP细胞中表达水平明显高于敏感细胞HCT-116细胞,miR-15a-5p及Wnt/β-catenin信号通路在大肠癌多药耐药的形成中发挥重要作用。3.上调miR-15a-5p表达可显着提高大肠癌耐药细胞HCT-116/LOHP对化疗药物的敏感性,而下调miR-15a-5p表达可显着降低大肠癌耐药细胞HCT-116/LOHP对化疗药物的敏感性,表明miR-15a-5p参与调控大肠癌多药耐药。4.上调miR-15a-5p表达能显着抑制Wnt/β-catenin信号通路的关键蛋白表达,如Wnt3a、β-catenin及其下游P-gp的表达,而下调miR-15a-5p表达则显着增加Wnt3a、β-catenin及P-gp的表达,miR-15a-5p通过影响Wnt/β-catenin通路的活性,介导转运蛋白P-gp的表达从而参与调控大肠癌多药耐药。
孙二峰[9]（2019）在《ID-1及MMP-7在直肠癌组织中的表达及临床意义》文中研究表明目的探讨ID-1（DNA结合抑制因子-1）及MMP-7（基质金属蛋白酶-7）在直肠癌及远癌组织的表达及相关性,并分析二者与直肠癌临床病理特征的联系,进一步阐明其与直肠癌发生发展的关系及临床意义。方法应用免疫组织化学染色技术检测远癌组织和直肠癌组织中ID-1及MMP-7的表达情况,运用统计学方法,分析ID-1及MMP-7在直肠癌组织中的表达与临床参数之间的关系。结果1、直肠癌组织中ID-1阳性率较远癌组织较高,P<0.05具有统计学意义。2、直肠癌组织中MMP-7阳性率较远癌组织较高,P<0.05具有统计学意义。3、直肠癌组织中ID-1和MMP-7的表达在性别、年龄、肿瘤大小分组中的分布无明显差异。4、直肠癌组织中ID-1和MMP-7的表达在分化程度、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移的分组中分布有显着差异,P<0.05且具有统计学意义。5、ID-1和MMP-7在直肠癌中的表达呈正相关,rS=0.493,P<0.05具有统计学意义。结论1、在临床相关性研究水平ID-1及MMP-7基因在直肠癌及远癌组织中的表达存在明显差异,可能与直肠癌的发生发展有关。2、在临床相关性研究水平上ID-1和MMP-7基因的表达可能与直肠癌的恶性行为有关。3、在临床相关性研究水平上ID-1和MMP-7基因的表达可能相互协同,共同参与了直肠癌的发生。
赵程进,杨艳梅,康海锋,朱云松[10]（2019）在《HAX-1和MMP-7在大肠癌中的表达及临床意义》文中研究指明目的 :研究造血细胞特异蛋白1相关蛋白X1（haematopoietic lineage cell specific protein 1-associated protein X-1, HAX-1）和基质金属蛋白酶-7（matrix metalloproteinase-7, MMP-7）在大肠癌中的表达情况及与临床病理特征和预后的关系。方法 :应用免疫组化法检测99例经手术切除的大肠癌标本和38例正常肠黏膜组织中HAX-1和MMP-7的表达,观察HAX-1和MMP-7在大肠癌中的表达情况及与临床病理特征和预后的关系,分析两者在大肠癌组织中表达的相关性。结果 :大肠癌组织中HAX-1和MMP-7的阳性表达率分别为81.82%和53.54%,与正常黏膜组织比较差异有统计学意义（P<0.05）。HAX-1表达水平与肿瘤分期、淋巴结转移和肿瘤分化程度相关（P<0.05）,MMP-7与肿瘤分期、淋巴结转移相关（P<0.05）。HAX-1和MMP-7在大肠癌组织中的表达呈正相关。HAX-1及MMP-7的表达与大肠癌患者的预后密切相关。结论 :HAX-1及MMP-7在大肠癌中均高表达,在大肠癌的发病过程中它们的高表达具有协同效应,与大肠癌淋巴结转移、临床分期及预后密切相关,并可作为判断大肠癌患者预后的重要指标之一。
二、MMP-7在大肠癌中的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、MMP-7在大肠癌中的研究进展（论文提纲范文）
（1）E-钙粘蛋白、β-连环素和基质金属蛋白酶-7在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 基质金属蛋白酶-7在肿瘤发生发展过程中的研究进展 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（2）FOXP3促进结直肠癌肝转移的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 :FOXP3在肠癌中高表达并激活上皮-间质转化促进肠癌细胞侵袭转移 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 临床资料收集及分组 |
| 2.2.1 辽宁省肿瘤医院肠癌样本及临床资料收集 |
| 2.3 生物信息学分析 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 细胞培养 |
| 2.4.2 Real-Time PCR |
| 2.4.3 CCK8实验 |
| 2.4.4 流式术检测细胞凋亡 |
| 2.4.5 Transwell侵袭实验 |
| 2.4.6 迁移实验 |
| 2.4.7 小干扰siRNA进行细胞转染 |
| 2.4.8 免疫组织化学实验 |
| 2.4.10 裸鼠皮下移植瘤模型 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 生物信息学分析证明FOXP3在肠癌组织较癌旁组织中高表达 |
| 3.1.1 GEPIA数据库分析显示FOXP3 在肠癌中高表达 |
| 3.1.2 肠癌(伴同时性或异时性肝转移)患者FOXP3表达与临床资料相关性的分析 |
| 3.1.3 FOXP3 高表达与肠癌KRAS突变及MSI亚型相关 |
| 3.2 FOXP3在肠癌及肝转移组织及肠癌细胞系中高表达 |
| 3.2.1 FOXP3蛋白在人肠癌组织及肝转移组织中较癌旁组织高表达 |
| 3.2.2 FOXP3在肠癌细胞系中较肠上皮细胞系表达上调 |
| 3.3 FOXP3促进肠癌细胞的增殖及侵袭 |
| 3.3.1 FOXP3在RKO及 HT-29 中沉默及过表达的效率验证 |
| 3.3.2 体外研究证明FOXP3促进肠癌细胞增殖 |
| 3.3.3 FOXP3抑制肠癌细胞凋亡 |
| 3.3.4 FOXP3促进肠癌细胞的侵袭 |
| 3.4 体内研究验证FOXP3促进肠癌细胞增殖及转移 |
| 3.4.1 体内验证FOXP3促进肠癌细胞增殖 |
| 3.4.2 体内研究验证FOXP3促进肠癌细胞肝转移 |
| 3.5 过表达FOXP3 促进肠癌细胞EMT |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 :FOXP3 促进β-catenin入核激活Wnt/β-catenin信号通路 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂 |
| 2.2 主要仪器 |
| 2.3 生物信息分析 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 细胞培养 |
| 2.4.2 siRNA转染 |
| 2.4.3 q RT-PCR |
| 2.4.4 蛋白免疫印迹(Westernblot)实验 |
| 2.4.5 免疫共沉淀 |
| 2.4.6 免疫荧光 |
| 2.4.7 双荧光素酶报告基因实验 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 权重共表达基因网络分析揭示肠癌肝转移相关基因集 |
| 3.2 KEGG分析及GSEA分析提示FOXP3 可能通过激活Wnt信号通路促进肠癌肝转移 |
| 3.3 Oncomine数据库验证Wnt下游靶基因在肠癌中高表达 |
| 3.4 FOXP3 在肠癌中激活Wnt/β-catenin信号通路 |
| 3.5 FOXP3 促进Wnt/β-catenin下游靶基因表达 |
| 3.6 FOXP3 通过促进β-catenin入核激活Wnt/β-catenin信号通路 |
| 3.7 FOXP3 与核内β-catenin直接结合共激活Wnt信号通路 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 :FOXP3 调节SAM循环改变MMP9 启动子甲基化促进肠癌转移 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.2 主要仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 代谢物提取 |
| 2.3.2 标准溶液配制 |
| 2.3.3 差异代谢物分析 |
| 2.3.4 Western blot |
| 2.3.5 甲基化特异性PCR(Methylmion Specific PCR,MSP) |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 非靶代谢组学分析发现FOXP3 抑制SAM循环 |
| 3.2 差异代谢物的筛选与鉴定 |
| 3.3 高表达FOXP3 抑制SAM循环 |
| 3.4 FOXP3经SAM循环影响MMP9 表达促进肠癌细胞侵袭 |
| 3.5 FOXP3 抑制SAM循环改变MMP9 启动子的甲基化状态 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）MiR-425-5p通过调控CTNND1促进结直肠癌增殖和转移的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 :miR-425-5p对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭、EMT和β-catenin通路及下游分子的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要材料、试剂和仪器 |
| 2.1.1 组织标本和细胞系 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 CCK-8检测细胞活力 |
| 2.2.3 免疫荧光 |
| 2.2.4 Quantitative Real-time PCR(qRT-PCR) |
| 2.2.5 Transwell检测细胞侵袭能力的变化 |
| 2.2.6 Western blotting检测蛋白表达水平变化 |
| 2.2.7 细胞划痕检测细胞迁移能力 |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 miR-425-5p在结直肠癌组织和外周血中的表达 |
| 3.2 过表达和敲减miR-425-5p对 CRC细胞表达miR-425-5p的影响 |
| 3.3 miR-425-5p对 CRC细胞增殖的影响 |
| 3.4 miR-425-5p对 CRC细胞周期的影响 |
| 3.5 miR-425-5p对 CRC细胞迁移能力的影响 |
| 3.6 miR-425-5p对 CRC细胞侵袭的影响 |
| 3.7 miR-425-5p对 CRC细胞上皮间质转化(EMT)的影响 |
| 3.8 miR-425-5p对 CRC细胞Fibronectin的影响 |
| 3.9 miR-425-5p对细胞中β-catenin表达的影响 |
| 3.10 miR-425-5p对 c-myc、Cyclin D1和MMP7 表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 :miR-425-5p通过调控CTNND1 影响CRC细胞的恶性生物学行为 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要材料、试剂和仪器 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 CCK-8检测细胞活力 |
| 2.2.3 qRT-PCR |
| 2.2.4 Transwell检测细胞侵袭能力 |
| 2.2.5 Western blotting检测蛋白表达水平 |
| 2.2.6 细胞划痕检测细胞迁移能力 |
| 2.2.7 双荧光素酶报告基因检测实验 |
| 2.2.10 HE染色 |
| 2.2.11 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 miR-425-5p靶向调控CTNND1 表达 |
| 3.2 miR-425-5p通过靶向负调控CTNND1 影响CRC细胞增殖 |
| 3.3 miR-425-5p通过靶向负调控CTNND1 影响CRC细胞迁移和侵袭 |
| 3.4 miR-425-5p通过靶向负调控CTNND1 影响CRC细胞EMT |
| 3.5 miR-425-5p在体内影响CRC的发生和转移 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性自我评价 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）ACBP通过Wnt/β-catenin信号通路抑制结直肠癌细胞增殖（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 一.前言 |
| 二.仪器设备与试剂 |
| 三.材料与方法 |
| 四.结果 |
| 五.讨论 |
| 六.结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 Wnt信号通路在结直肠癌中的作用及其治疗靶点的研究进展 |
| 参考文献 |
| 缩略语表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（5）岩白菜素通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对结肠癌细胞生物学行为的影响及作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 绪论 |
| 第一章 PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白在结直肠癌中的表达以及临床意义 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料和方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 岩白菜素通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制结肠癌细胞的恶性生物学行为 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 已发展的文章和主要科研成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（6）通过生物信息学的方法对大肠癌的核心基因预测与验证（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文对照表 |
| 引言 |
| 第一章 研究材料和方法 |
| 1.1 芯片数据来源 |
| 1.2 数据处理 |
| 1.3 DEGs的基因本体论(GO)和KEGG途径富集分析 |
| 1.4 DEGs的PPI网络构建和关键基因筛选 |
| 1.5 关键基因验证分析及相关性分析 |
| 1.6 SCG2和microRNAs关系预测 |
| 1.7 microRNAs在大肠癌组织的表达及其与生存预后的关系 |
| 第二章 研究结果 |
| 2.1 大肠癌和正常组织的DEGs |
| 2.2 三组不同的数据集取交集 |
| 2.3 GO和 KEGG通路富集分析 |
| 2.4 差异表达基因的PPI网络及功能模块分析 |
| 2.5 关键基因验证及不同分期的大肠癌比较和相关性分析 |
| 2.6 SCG2与microRNA相互作用预测结果 |
| 2.7 miR-802在大肠癌中的表达水平与生存预后分析 |
| 第三章 讨论 |
| 3.1 对SCG2基因功能分析 |
| 3.1.1 SCG2的结构、定位和相关作用 |
| 3.1.2 SCG2参与的生物学过程 |
| 3.2 对NR3C2基因功能分析 |
| 3.2.1 NR3C2的结构、定位和相关作用 |
| 3.2.2 NR3C2参与的生物学过程 |
| 3.2.3 NR3C2与肿瘤 |
| 3.3 对AURKA基因功能分析 |
| 3.3.1 AURKA的结构、定位和相关作用 |
| 3.3.2 AURKA参与的生物学过程 |
| 3.3.3 AURKA与肿瘤 |
| 3.4 对CCNB1基因功能分析 |
| 3.4.1 CCNB1的结构、定位和相关作用 |
| 3.4.2 CCNB1参与的生物学过程 |
| 3.4.3 CCNB1与肿瘤 |
| 3.5 对CCNA2基因功能分析 |
| 3.5.1 CCNA2的结构、定位和相关作用 |
| 3.5.2 CCNA2参与的生物学过程 |
| 3.5.3 CCNA2与肿瘤 |
| 3.6 对CHRDL1基因功能分析 |
| 3.6.1 CHRDL1的结构、定位和相关作用 |
| 3.6.2 CHRDL1参与的生物学过程 |
| 3.6.3 CHRDL1与肿瘤 |
| 3.7 对CLCA1基因功能分析 |
| 3.7.1 CLCA1的结构、定位和相关作用 |
| 3.7.2 CLCA1参与生物学过程 |
| 3.7.3 CLCA1与肿瘤 |
| 3.8 对COL8A1基因功能分析 |
| 3.8.1 COL8A1的结构、定位和相关作用 |
| 3.8.2 COL8A1参与的生物学过程 |
| 3.8.3 COL8A1与肿瘤 |
| 3.9 对CXCL2基因功能分析 |
| 3.9.1 CXCL2的结构、定位和相关作用 |
| 3.9.2 CXCL2参与的生物学过程 |
| 3.9.3 CXCL2与肿瘤 |
| 3.10 对ZG16基因功能分析 |
| 3.10.1 ZG16的结构、定位和相关作用 |
| 3.10.2 ZG16参与的生物学过程 |
| 3.10.3 ZG16与肿瘤 |
| 3.11 miR-802与肿瘤 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述:SCG2、CCNB1、CCNA2、miR-802 在肿瘤中研究的进展 |
| 引言 |
| 1.对SCG2基因功能分析 |
| 1.1 SCG2的结构、定位和相关作用 |
| 1.2 SCG2参与的生物学过程 |
| 1.3 SCG2与MAPK级联 |
| 1.4 SCG2与血管生成 |
| 1.5 SCG2与肿瘤 |
| 2.对SCG2基因功能分析 |
| 2.1 CCNB1的结构、定位和相关作用 |
| 2.2 CCNB1参与的生物学过程 |
| 2.3 CCNB1与肿瘤 |
| 3.对CCNA2基因功能分析 |
| 3.1 CCNA2的结构、定位和相关作用 |
| 3.2 CCNA2参与的生物学过程 |
| 3.3 CCNA2与肿瘤 |
| 4.miR-802与肿瘤 |
| 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（7）PDLIM5及BCAT1在非小细胞肺癌中的作用及分子机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 :PDLIM5 促进NSCLC增殖和侵袭,并抑制Hippo信号通路 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 免疫组织化学 |
| 2.1.1 主要仪器及生产商 |
| 2.1.2 主要试剂及生产商 |
| 2.1.3 组织样本 |
| 2.1.4 主要实验步骤 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.2.1 主要仪器及生产商 |
| 2.2.2 主要试剂及生产商 |
| 2.2.3 主要实验步骤 |
| 2.3 Western Blot |
| 2.3.1 主要仪器及生产商 |
| 2.3.2 主要试剂及生产商 |
| 2.3.3 主要试剂配方 |
| 2.3.4 主要实验步骤 |
| 2.4 细胞转染与干扰 |
| 2.4.1 主要仪器及生产商 |
| 2.4.2 主要试剂及生产商 |
| 2.4.3 主要实验步骤 |
| 2.5 MTT和集落形成实验 |
| 2.5.1 主要仪器及生产商 |
| 2.5.2 主要试剂及生产商 |
| 2.5.3 主要实验步骤 |
| 2.6 Transwell细胞侵袭实验 |
| 2.6.1 主要仪器及生产商 |
| 2.6.2 主要试剂及生产商 |
| 2.6.3 主要实验步骤 |
| 2.7 细胞凋亡实验 |
| 2.7.1 主要仪器及生产商 |
| 2.7.2 主要试剂及生产商 |
| 2.7.3 主要实验步骤 |
| 2.8 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 PDLIM5在肺癌组织中高表达 |
| 3.2 PDLIM5在肺癌组织中的表达与临床病理因素的关系 |
| 3.3 PDLIM5在肺癌中的表达与患者的生存分析 |
| 3.4 PDLIM5在肺癌细胞中高表达 |
| 3.5 PDLIM5促进肺癌细胞增殖 |
| 3.6 PDLIM5 调控肺癌细胞中增殖相关蛋白cyclin E以及p21 表达 |
| 3.7 PDLIM5促进肺癌侵袭 |
| 3.8 PDLIM5 抑制NSCLC凋亡 |
| 3.9 PDLIM5 调控Hippo通路相关蛋白 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 :BCAT1 促进NSCLC增殖和侵袭,并激活Wnt信号通路 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 免疫组织化学 |
| 2.1.1 主要仪器及生产商 |
| 2.1.2 主要试剂及生产商 |
| 2.1.3 组织样本 |
| 2.1.4 主要实验步骤 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.2.1 主要仪器及生产商 |
| 2.2.2 主要试剂及生产商 |
| 2.2.3 主要实验步骤 |
| 2.3 Western Blot |
| 2.3.1 主要仪器及生产商 |
| 2.3.2 主要试剂及生产商 |
| 2.3.3 主要试剂配方 |
| 2.3.4 主要实验步骤 |
| 2.4 细胞转染与干扰 |
| 2.4.1 主要仪器及生产商 |
| 2.4.2 主要试剂及生产商 |
| 2.4.3 主要实验步骤 |
| 2.5 实时荧光定量PCR |
| 2.5.1 主要仪器及生产商 |
| 2.5.2 主要试剂及生产商 |
| 2.5.3 主要实验步骤 |
| 2.6 MTT和集落形成实验 |
| 2.6.1 主要仪器及生产商 |
| 2.6.2 主要试剂及生产商 |
| 2.6.3 主要实验步骤 |
| 2.7 Transwell细胞侵袭实验 |
| 2.7.1 主要仪器及生产商 |
| 2.7.2 主要试剂及生产商 |
| 2.7.3 主要实验步骤 |
| 2.8 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 BCAT1在肺癌组织中过表达 |
| 3.2 BCAT1在肺癌组织中的表达与临床病理因素的关系 |
| 3.3 BCAT1在肺癌中的表达与患者的生存分析 |
| 3.4 BCAT1在肺癌细胞系中高表达 |
| 3.5 BCAT1促进肺癌细胞增殖 |
| 3.6 BCAT1促进肺癌细胞侵袭 |
| 3.7 BCAT1 调控Wnt信号通路及其下游cyclin D1,MMP7和c-myc表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（8）miR-15a-5p通过Wnt/β-catenin通路调控大肠癌多药耐药的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 Wnt/β-catenin 信号通路与大肠癌研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）ID-1及MMP-7在直肠癌组织中的表达及临床意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 英文缩写 |
| 攻读学位期间发表的学术成果 |
| 附图 |
（10）HAX-1和MMP-7在大肠癌中的表达及临床意义（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 结果判定 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 HAX-1和MMP-7在大肠癌组织及正常黏膜组织中表达 |
| 2.2 HAX-1及MMP-7的表达与大肠癌临床病理特征的关系 |
| 2.3 HAX-1和MMP-7表达的相关性 |
| 2.4 HAX-1和MMP-7与大肠癌长期生存率的关系 |
| 3 讨论 |
四、MMP-7在大肠癌中的研究进展（论文参考文献）
- [1]E-钙粘蛋白、β-连环素和基质金属蛋白酶-7在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义[D]. 李秀. 西南医科大学, 2020(12)
- [2]FOXP3促进结直肠癌肝转移的机制研究[D]. 王哲. 中国医科大学, 2020(01)
- [3]MiR-425-5p通过调控CTNND1促进结直肠癌增殖和转移的研究[D]. 刘鼎盛. 中国医科大学, 2020(01)
- [4]ACBP通过Wnt/β-catenin信号通路抑制结直肠癌细胞增殖[D]. 佟鑫. 内蒙古医科大学, 2020(03)
- [5]岩白菜素通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对结肠癌细胞生物学行为的影响及作用机制研究[D]. 高旭灿. 南方医科大学, 2020(01)
- [6]通过生物信息学的方法对大肠癌的核心基因预测与验证[D]. 楚硕. 河南大学, 2020(02)
- [7]PDLIM5及BCAT1在非小细胞肺癌中的作用及分子机制[D]. 林秀敏. 中国医科大学, 2020(01)
- [8]miR-15a-5p通过Wnt/β-catenin通路调控大肠癌多药耐药的研究[D]. 黄艳洁. 承德医学院, 2020(02)
- [9]ID-1及MMP-7在直肠癌组织中的表达及临床意义[D]. 孙二峰. 佳木斯大学, 2019(03)
- [10]HAX-1和MMP-7在大肠癌中的表达及临床意义[J]. 赵程进,杨艳梅,康海锋,朱云松. 南通大学学报(医学版), 2019(03)