论文摘要
一、研究背景与目的目前，临床上对甲状腺癌的研究较少，治疗也较多的采用术后单一的内分泌治疗。南方医院生物治疗中心在对部分甲状腺患者进行除了内分泌之外的CIK联合IL-2生物治疗，从提高患者自身免疫能力出发，取得了良好的效果和疾病控制率。我们在临床治疗中发现，CIK联合IL-2生物治疗在治疗部分甲状腺癌患者的同时，能引起患者甲状腺功能如T3、T4、TSH的变化，且患者治疗效果颇佳。因为甲状腺癌在恶性肿瘤中治愈率较高，所以术后的辅助治疗显得尤为重要。故通过体外实验及临床观察，针对CIK联合IL-2生物治疗是否对甲状腺癌细胞的甲状腺功能及对肿瘤患者，尤其是甲状腺癌患者的甲状腺功能造成影响方面进行摸索、探讨，希望能找出其两者的内在联系，从而进一步明确CIK联合IL-2生物疗法治疗甲状腺癌或辅助甲状腺癌术后的内分泌治疗的可能的机理，为甲状腺癌患者的治疗提供一定的理论依据。二、材料与方法（一）材料DMEM干粉和胎牛血清均购自Hyclone公司，24、96孔细胞培养板为Costar产品，Hepes购自美国Sigma公司，2mmol／l L-谷氨酰胺溶液，1mmol／l丙酮酸钠溶液，0.25％胰蛋白酶，0.04％EDTA溶液，0.01％PBS缓冲液（PH为7.4），D-Hank’s液（pH为7.4），鼠抗人甲状腺球蛋白抗体、鼠IgG和HRP标记兔抗鼠二抗均由南方医院病理科提供，CIK细胞和IL-2。T3、T4、TSH放免免放检测试剂盒，NAPCO MODEL5410型二氧化碳电热恒温箱，YX-280型手提式压力蒸汽消毒器，Nikon倒置显微镜及相机，SIGMA1-13型离心机，LSY-Ⅱ型普通离心机，微量加样器，荧光显微镜，FA1604S型电子分析天平，超净工作台，眼科剪刀，镊子。（二）实验方法1．甲状腺癌组织的取材、处理和乳头状癌上皮细胞的培养及其鉴定。2．显微镜下观察培养过程中甲状腺癌细胞的形态学特征并拍照。3．原代甲状腺癌细胞培养及传代。4．实验分组及CIK，IL-2刺激实验的实施。5．放免、免放试剂盒对细胞实验前后T3，T4进行检测对比。6．MTT法测定细胞增殖情况。7．临床实验对象的选择和病人CIK联合IL-2治疗实验标准的确定。8．收集病人血标本并进行治疗前后病人T3、T4及TSH检测。9．统计学处理：采用SPSS10.0统计分析软件，其中细胞实验采用定量数据重复测量的方差分析，临床实验采用病人自身治疗前后数据的配对t检验。三、结果1．甲状腺癌细胞培养及鉴定。原代培养的甲状腺癌细胞呈梭形或不规则多角形贴壁生长，免疫荧光染色结果显示：甲状腺球蛋白主要定位于甲状腺癌细胞的胞核和胞浆。2．CIK，IL-2对人乳头状甲状腺癌细胞的甲状腺激素分泌功能的影响。甲状腺癌细胞对高浓度IL-2的刺激有反应，甲状腺分泌功能呈下降趋势（T3变化同T4，P＜0.05）。而在低中浓度组，与空白对照组的变化相比无统计学差异，显示甲状腺癌细胞对低浓度即正常治疗浓度IL-2无反应（P＞0.05）。3．CIK，IL-2对人乳头状甲状腺癌细胞增殖情况的影响。短期内，无论是单独低、中、高浓度IL-2组均对甲状腺癌细胞生长增殖无显著抑制；而CIK+IL-2组则P＜0.05，提示IL-2可以增强CIK杀伤能力。4．CIK联合IL-2对临床肿瘤病人尤其是甲状腺癌病人甲状腺激素分泌功能的影响。治疗前后病人T3、T4及TSH变化均无统计学差异（P＞0.05），显示标准CIK细胞联合IL-2生物治疗对临床肿瘤病人甲状腺激素分泌功能无影响。四、初步结论1．经鼠抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体鉴定、细胞形态学以及甲状腺分泌功能的特点，成功的培养出了人乳头状甲状腺癌细胞的细胞模型。2．本研究建立了人乳头状甲状腺癌细胞的体外细胞模型，药物作用研究表明，高浓度IL-2能够下调甲状腺癌细胞甲状腺T3T4分泌功能，但IL-2对甲状腺癌细胞的直接抑制作用弱，故IL-2与CIK作用机制不同，并非通过杀伤细胞或抑制细胞增殖使得T3、T4下降，而是直接抑制癌细胞的T3、T4的分泌功能。3．CIK联合IL-2可显著抑制甲状腺癌细胞生长增殖，而IL-2则起到一个辅助保持提高CIK细胞效应的功能，即足够浓度的IL-2是培养CIK茁壮成长的沃土。4．CIK联合IL-2对临床肿瘤病人甲状腺分泌功能无影响。
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