论文摘要
目的观察HBV C蛋白在NK细胞中的表达及其对NK细胞功能的影响,从而为乙型肝炎发病机制及防治的研究提供新的思路。方法构建HBV C基因真核表达载体pHBI-CMV-HBC,经双酶切及测序鉴定证实该重组真核表达质粒含有所需目的基因。然后,通过脂质体转染法将其转入NK-92细胞;48h后,通过Western blotting检测HBV C基因在NK-92细胞中HBV C蛋白的表达情况;然后通过MTT比色法检测NK-92细胞对HepG2细胞的细胞毒作用,用ELISA法检测NK-92细胞分泌的IFN-γ水平。结果经酶切和测序鉴定证实,所构建pHBI-CMV -HBC载体结构正确,目的片断与GeneBank中HBV C基因完全符合,没有发生突变。Western blotting结果表明,pHBI-CMV -HBC转染NK-92细胞后,可在NK-92细胞中表达大小约为21KDa的C蛋白,并且可以和特异性抗HBc单克隆抗体结合。MTT比色法结果显示与两个对照组相比,转染了pHBI-CMV -HBC的NK-92细胞对于HepG2细胞的细胞毒活性有所提高,差异具有显著性（P<0.01）。ELISA实验表明,转染了pHBI-CMV-HBC的NK-92细胞分泌IFN-γ的水平也较上述两对照组提高,差异具有显著性（P<0.01）。结论1、pHBI-CMV-HBC载体可以通过脂质体法转染到NK细胞中,并且在其中成功表达。2、HBV C基因瞬时高表达使NK-92细胞毒功能增强。3、HBV C基因瞬时高表达使NK-92细胞分泌IFN-γ增加。