论文摘要
蓝细菌,又称蓝绿藻,是一种可以进行光合作用的原核生物。一些蓝细菌,如丝状蓝细菌鱼腥蓝细菌,还可以进行固氮作用。鱼腥蓝细菌生长在淡水环境中,在营养丰盛的条件下,藻丝中细胞以营养细胞形式存在。当环境中的化合态氮源缺乏时,会沿藻丝以每10个营养细胞为间隔分裂出可以进行固氮作用的异形细胞,将氮气固定为化合态的氮源,并传输给临近的营养细胞,从而帮助整个藻丝渡过氮源匮乏的时期。因此,鱼腥蓝细菌是作为研究细胞分化良好的模式生物。2-酮戊二酸（2-oxogluatarate, 2-OG）,来自高度保守的三羧酸循环途径,不仅是一个关键的代谢产物,同时也在许多细菌、植物甚至高等动物中,作为一种信号分子。在蓝细菌中,2-OG被证明是蓝细菌氮源缺乏的信号分子。而全局转录因子NtcA与信号传导蛋白被认为是2-OG的感应蛋白。NtcA属于Crp-Fnr转录因子家族,其典型的成员是结合cAMP的CAP蛋白。我们解析了鱼腥蓝细菌PCC 7120中NtcA的apo-form（1.90 （A|°））、结合2-OG（2.60 （A|°））和结合2-OG的不可代谢类似物—2,2-二氟代戊二酸（2.40 （A|°））的三个结构。三个结构都是同源二体的形式,每个亚基上有一个N端的效应分子结合结构域和一个C端的DNA结合结构域,两个结构域之间由一个长的螺旋（C螺旋）连接。2-OG结合在效应分子结合结构域的口袋中,这与CAP蛋白的cAMP结合位点相似,但是结合的具体方式不同。通过结构比较分析可以推导出2-OG结合引起NtcA可能的信号传递路径:2-OG的结合导致C螺旋之间形成更紧密的coiled-coil构象,从而使两个DNA结合螺旋（F螺旋）间的距离拉近以更适合DNA识别。cAMP的结合使CAP蛋白的激活状态发生从无到有的改变,而我们解析的结构则解释了为何NtcA在apo的状态也有DNA的结合能力,而2-OG的结合只是进一步提高这一结合能力。这些结果为2-OG调控的全局转录因子的功能提供了结构生物学的依据。PII是细菌、古细菌和植物中高度保守的信号传导蛋白。有一个大的柔性环状结构（T-loop）,通过发生共价修饰或者结合不同的效应分子采取不同的构象以调节不同靶蛋白的功能。PipX是最早在单细胞蓝细菌Synechococcus PCC 7942中鉴定出的PII的一种结合蛋白,仅存在于蓝细菌中,并且PipX与NtcA也存在相互作用。PipX与PII和NtcA的结合是受2-OG浓度调节的,这使得PII间接调节了NtcA的转录活性。我们解析了PII–PipX复合物1.90 （A|°）的结构。PII同源三体通过三个T-loop与三个PipX结合。PII与之前报导的Synechococcus中的同源结构类似,由反向平行四个β折叠片的核心结构和侧面两个α螺旋组成。PipX则是一个新的结构,由五个扭曲的反向平行β折叠片和两个α螺旋组成,这与PⅡ的结构很相似。每个PⅡ亚基的T-loop像天线一样从核心结构伸出,以氢键介导与两个PipX分子之间的结合。此外,PipX的β片与的PⅡ核心结构间的相互作用也为复合物的形成提供了一部分帮助。结构比较分析结果显示,PipX与2-OG在上的结合位点是重合的,并且与蓝细菌中PⅡ的14个特征残基有交集。我们利用该复合物中PipX的结构与前面解析NtcA结合2-OG的结构模拟出NtcA–PipX复合物的结构,模型显示PipX利用相近的区域与PⅡ和NtcA产生相互作用。这些结果为PⅡ是如何通过PipX在2-OG的浓度依赖下调节NtcA的活性提供了结构生物学依据。本文的工作围绕鱼腥蓝细菌异形细胞分化早期调控蛋白的结构进行研究,为异形胞分化的调节机制提供了新的结构基础。