大鼠骨髓间充质干细胞移植诱导肝移植免疫耐受的研究

论文摘要

目的:通过观察不同处理因素对大鼠肝移植术后大鼠生存时间的影响,探讨骨髓间充质干细胞移植联合亚剂量FK506诱导肝移植术后免疫耐受的可行性及其可能机制。材料和方法:首先建立稳定可靠的大鼠原位肝移植动物模型。选用雄性SD大鼠160只,分为供体组和受体组。应用改良“二袖套法”进行大鼠原位肝移植,通过熟练的显微外科技术操作,缩短无肝期时间,并结合多项改良措施,保障手术成功。取大鼠骨髓,分离、纯化,体外扩增骨髓MSC至第三代,并行CFDA标记。标记的大鼠MSC行门脉注射,7 d后进行连续切片,DAPI染色并在荧光显微镜下观察大鼠MSC归巢情况。采用近交系雌性Lewis大鼠和雌性BN大鼠共64只,LEWIS为供体（n = 32）,BN为受体（n = 32）,制作原位肝移植大鼠模型32只,分为4组。A组:受体肝在移植后于门静脉注射1 mL生理盐水;B组:受体肝在移植后于门静脉注射2×106 MSCs; C组:受体肝在移植后于门静脉注射1 mL生理盐水,给予治疗剂量FK506(0.5 mg/kg.d-1);D组:受体肝在移植后于门静脉注射2×106 MSC,同时给予亚治疗剂量FK506(0.125 mg/kg.d-1)。全程观察动物全身情况,记录存活时间,监测术后l4 d血清谷丙氨酸氨基转移酶（ALT ）、总胆红素（TBIL）浓度水平,以及移植肝脏的病理变化;PCR半定量检测血液SRY;流式细胞学检测BN大鼠脾脏HIS19抗体,评估嵌合体的形成情况。结果:联合MSC移植和亚治疗剂量FK506组生存时间（52.8±4.1） d明显长于生理盐水对照组（12.5±0.8） d和单纯MSC注射组（12.7±1.2） d,与免疫抑制剂组（47.8±3.8） d相当,其病理评分依据Banff方案也较生理盐水对照组[重度（Ⅲ级）]和单纯MSC注射组[中度（Ⅱ级）]明显降低,为轻度（Ⅰ级）。联合MSC移植和亚治疗剂量FK506组受体脾细胞中HIS19阳性细胞含量达（13.0±2.5）%,较生理盐水对照组（0.4±0.5）%、单纯MSCs注射组（0.5±0.3）%和治疗剂量FK506注射组（1.4±0.9）%显著增多（P<0.01）。另外,联合MSC移植和亚治疗剂量FK506组、治疗剂量FK506注射组ALT水平分别为（49.48±9.70） U /L和（54.3±11） U /L,较生理盐水对照组[（886.81±90.3） U /L]和单纯MSC注射组[（869.7±109） U /L]显著降低（P<0.01）;联合MSC移植和亚治疗剂量FK506组、治疗剂量FK506注射组TBIL浓度分别为（13.52±2.28）μmol/L和（13.35±2.05）μmol/L,较生理盐水对照组[（178.72±35.81）μmol/L]和单纯MSC注射组[（179.92±37.67）μmol/L]亦显著降低（P<0.01或P<0.05）。结论:骨髓间充质干细胞移植能减轻同种异基因肝移植的急性排斥反应,联合小剂量FK506能诱导微嵌合体的产生,延长移植大鼠生存时间,诱导移植肝免疫耐受。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分：大鼠同种异体肝移植模型的建立
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分：大鼠MSC 细胞的体外分离、培养、鉴定与体内示踪
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分：同种异基因MSC 移植对大鼠肝脏移植急性排斥反应的影响
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 文献综述