快速检测食品中磺胺二甲基嘧啶残留的胶体金免疫层析方法的建立

论文摘要

磺胺二甲基嘧啶（Sulfadimidine, SM2）属磺胺类药物,是一种重要的广谱抑菌剂,常被用于预防和控制畜禽疾病。磺胺二甲基嘧啶及其代谢产物容易在动物肌肉组织、脏器或其他可食性部分（如蛋、乳等）中蓄积,通过食物链进入人体,给人类健康带来极大的危害。因此,加强兽药残留的监控和检测,建立一种快速、简便的筛查方法具有重要的意义。本研究基于竞争抑制免疫层析原理,旨在建立一种快速、简便的针对磺胺二甲基嘧啶残留的胶体金免疫层析方法。通过应用胶体金免疫层析技术,将抗SM2单克隆抗体标记到胶体金颗粒上,制备金标抗体；同时将制备的人工抗原SM2-BSA包被在NC膜上,作为检测线；将驴抗鼠二抗包被在NC膜上,作为质控线。通过对SM2胶体金免疫层析试纸条各项参数进行优化,确定最终工艺条件,成功建立快速检测SM2残留的胶体金免疫层析法,并研制出SM2胶体金试纸条。SM2胶体金试纸条的生产工艺参数如下：胶体金颗粒大小为40 nm,抗体标记量为1.0μg/mL,标记pH为7.0,抗原浓度为0.5 mg/mL,驴抗鼠二抗浓度为1.0 mg/mL。参照以上生产工艺参数,制备的SM2胶体金试纸条的检测灵敏度可达10 ng/mL,检测时间为5 min,检测范围为0～10000 ng/mL,且与磺胺甲基嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑及磺胺吡啶等8种磺胺类药物的交叉反应率较小。通过60℃加速保存实验,预计该试纸条保质期为18个月。以猪肉、猪肝、猪肾、鸡肉、鸡蛋、牛肉、鱼肉、虾肉及蜂蜜为实际样本进行SM2的加标回收实验,以乙腈为提取剂,用磷酸缓冲液稀释一定倍数后可消除基质影响,且在9种样品基质中的最低检出限均低于我国的限量标准（100μg/kg）。本研究成功建立了磺胺二甲基嘧啶残留检测的胶体金免疫层析方法,并研制出SM2胶体金快速检测试纸条。该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、检测时间短、成本低廉等优点,可适用于动物源性食品（如猪肉、猪肝、猪肾、鸡肉、鸡蛋、牛肉、鱼肉、虾肉及蜂蜜等）中磺胺二甲基嘧啶残留的现场大批量快速检测。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 第一章 前言
• 1.1 磺胺二甲基嘧啶概述
• 1.1.1 磺胺二甲基嘧啶理化性质
• 1.1.2 磺胺二甲基嘧啶的用途
• 1.1.3 磺胺二甲基嘧啶残留的危害
• 1.2 磺胺二甲基嘧啶的限量标准
• 1.3 国内外检测方法研究进展
• 1.3.1 高效液相色谱法（HPLC）
• 1.3.2 液质联用法（HPLC-MS）
• 1.3.3 气质联用法（GC-MS）
• 1.3.4 酶联免疫吸附法（ELISA）
• 1.3.5 胶体金免疫层析法
• 1.4 人工抗原制备的概述
• 1.5 胶体金免疫层析技术的概述
• 1.5.1 胶体金的性质和特点
• 1.5.2 免疫层析技术
• 1.5.3 胶体金免疫层析技术
• 1.6 选题目的和意义
• 第二章 胶体金免疫层析法的建立
• 2.1 材料与仪器
• 2.1.1 实验试剂
• 2.1.2 实验仪器
• 2.1.3 试纸条材料
• 2.1.4 待检样品
• 2.1.5 溶液配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 胶体金的制备
• 2.2.2 胶体金质量的分析
• 2.2.3 胶体金标记抗体蛋白
• 2.2.4 包被抗原的合成
• 2.2.5 层析条件的选择
• 2.2.6 试纸条的组装
• 2.2.7 试纸条的检测及结果判断
• 2.2.8 试纸条的评价
• 2.2.9 样品前处理方法
• 2.2.10 样本基质影响的消除
• 2.2.11 样本提取液的检测限
• 2.2.12 试纸条法与ELISA法的比对
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 待标记抗体的纯化
• 3.2 胶体金的质量分析
• 3.2.1 目测判断
• 3.2.2 可见光光谱扫描
• 3.2.3 透射电镜扫描
• 3.3 金标抗体的鉴定
• 2-BSA的鉴定'>3.4 SM₂-BSA的鉴定
• 3.4.1 直接点样法鉴定
• 3.4.2 分光光度法鉴定
• 3.4.3 间接竞争ELISA法鉴定
• 3.5 层析条件的确定
• 3.5.1 胶体金标记pH的确定
• 3.5.2 抗体标记量的确定
• 3.5.3 抗原包被量的确定
• 3.5.4 金标抗体干燥条件的确定
• 3.5.5 抗原包被条件的的确定
• 3.6 试纸条的评价
• 3.6.1 试纸条的灵敏度
• 3.6.2 试纸条的特异性
• 3.6.3 试纸条的重复性
• 3.6.4 加速保存实验
• 3.7 样本基质影响的消除
• 3.8 样本提取液的检测限
• 3.8.1 猪肉提取液的检测限
• 3.8.2 猪肝提取液的检测限
• 3.8.3 猪肾提取液的检测限
• 3.8.4 鸡肉提取液的检测限
• 3.8.5 鸡蛋提取液的检测限
• 3.8.6 牛肉提取液的检测限
• 3.8.7 鱼肉提取液的检测限
• 3.8.8 虾肉提取液的检测限
• 3.8.9 蜂蜜提取液的检测限
• 3.9 试纸条法与ELISA法的比对
• 3.10 讨论
• 3.10.1 胶体金的制备
• 3.10.2 胶体金标记抗体
• 3.10.3 试纸条的组成材料
• 3.10.4 样本基质的影响
• 3.10.5 实际样本的处理
• 2胶体金试纸条的实际应用'>3.10.6 SM₂胶体金试纸条的实际应用
• 第四章 结论与展望
• 4.1 结论
• 4.2 展望
• 4.2.1 试纸条灵敏度的提高
• 4.2.2 实际样本检测限的确定
• 4.2.3 多残留试纸条的研制
• 4.2.4 检测结果定量化
• 致谢
• 参考文献
• 个人介绍
• 攻读学位期间的研究成果