论文摘要
目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate, EGCG）诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,探讨其作用机制是否与调节细胞核转录因子κB（NF-κB）入核有关。方法:Hoechst染色法检测SGC-7901细胞经EGCG处理前后凋亡形态学改变;采用10ng/ml肿瘤坏死因子-α（TNF-α）作为NF-κB入核诱导剂,应用Western Blot方法探讨TNF-α对NF-κB入核影响,同时Western Blot方法也用于观察EGCG作用前后NF-κB蛋白在胞浆内及胞核内的变化;PI染色流式细胞术检测EGCG调节NF-κB入核前后细胞凋亡率改变;DNA琼脂糖凝胶电泳观察EGCG诱导细胞DNA断裂情况。结果:Hoechst染色法显示,EGCG处理后部分细胞呈现典型凋亡形态改变:核致密浓染或呈碎块状、苍白色。Western Blot方法检测发现,10ng/ml的TNF-α作为NF-κB入核诱导剂分别作用SGC-7901细胞30、60、90、120min后,核内NF-κB/p65明显增多并在60min时出现平台期;60μg/ml的EGCG预处理细胞不同时间（0、12、24、36、48h）后,再以10ng/ml的TNF-α处理60min,检测发现核内NF-κB明显下降并在24h时出现平台期;不同浓度EGCG（40、60、80、100μg/ml）预处理细胞24h后,再加10ng/ml的TNF-α处理60min,核内NF-κB呈浓度依赖性下降。流式细胞术显示,10ng/ml的TNF-α处理细胞60min后,细胞凋亡率为（3.73±0.15）%,60μg/ml EGCG处理细胞24h后,再以10ng/ml的TNF-α处理细胞60min,凋亡率为（16.63±0.15）%;NF-κB通路阻断剂吡咯啉烷二甲基硫脲（Pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC） 100μmol/L预处理30min后再以10ng/ml的TNF-α处理细胞60min,细胞凋亡率为（21.47±0.12） %。EGCG 60μg/ml处理细胞24h,再以10ng/ml TNF-α处理细胞60min,或者100μmol/L PDTC处理细胞30min后再以10ng/ml TNF-α处理细胞60min,DNA琼脂糖凝胶电泳出现明显梯形条带。结论:EGCG能够诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡;对TNF-α诱导的NF-κB入核有抑制作用;其诱导凋亡作用可能与抑制了NF-κB的入核有关。
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标签：表没食子儿茶素没食子酸酯论文; 胃肿瘤论文; 核转录因子论文; 细胞凋亡论文;