人脂肪来源干细胞裸鼠皮下移植的实验性研究

论文摘要

目的:1.分离和培养人脂肪来源干细胞（hADSCs）,对hADSCs的干细胞特性进行鉴定。2.将表达pEGFP-N3的hADSCs进行裸鼠皮下注射移植,观察细胞的存活和转归。材料和方法:人脂肪组织取材,酶消化法分离培养hADSCs。观察细胞形态。以成脂和成骨诱导液连续培养hADSCs 3周后,分别进行油红染色和钙盐染色,观察细胞多向分化能力。分别于原代和第3代用流式细胞仪对细胞进行细胞表面分化抗原CD45、CD34、CD133检测,观察细胞不同阶段的表型特征。hADSCs体外培养后,以脂质体法转染pEGFP-N3质粒,经G418筛选,获得高阳性率的细胞。将筛选后的细胞以注射方式植入裸鼠皮下组织中。分别于8周和12周取材,利用活体化学发光和荧光成像系统进行活体荧光观察,组织切片观察,确定hADSCs植入裸鼠皮下后的存活情况与转归。结果:1.利用胶原酶消化法,胶原酶/脂肪比3:1、胶原酶浓度1mg/ml、消化时间1h,可以获得大量hADSCs。体外培养的人ADSC细胞为成纤维细胞样。2.hADSCs在成脂和成骨诱导液作用下,可以分别向脂肪细胞和成骨细胞分化,表现为油红染色和钙盐染色阳性。3.在新鲜分离的细胞中有大量CD45+CD34-细胞（ 37.62% ）和CD45-CD34+细胞（ 24.22%）;原代细胞中, CD34+CD45-细胞占大多数（58.76%）,未见CD45+细胞和CD133+细胞。培养3代后,CD34+CD45-细胞比例降低（30.47%）,CD45+细胞仅见少量,未见CD133+细胞。4.pEGFP-N3质粒-脂质体复合物转化脂肪来源干细胞24h后,大量细胞表达绿色荧光蛋白,绿色荧光蛋白阳性细胞率达（13.0±3.5）%。以适宜浓度G418筛选后,绿色荧光蛋白阳性细胞率达（65.0±5.4）%。5.以注射方式将pEGFP-N3转染后的hADSCs植入裸鼠皮下组织中,8w和12w后,大体标本可见植入区周围分布荧光阳性区;荧光镜下可见皮下组织中分布荧光阳性细胞,对应光镜下皮下组织中未见荧光阳性结构。结论:1.脂肪组织中可以分离获得大量可贴壁生长的细胞,其具有多向分化能力,并具有与干细胞相同的表型特点,即CD34+CD45-CD133-。2.以脂质体法可以将pEGFP-N3质粒转染入hADSCs,G418筛选后阳性率明显提高。3.hADSCs裸鼠皮下移植后可以向脂肪细胞分化,hADSCs可作为脂肪组织工程的种子细胞。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 第一部分 人脂肪来源干细胞的分离培养及鉴定
• 材料和方法
• 结 果
• 讨 论
• 3 转染人脂肪来源间充质干细胞'>（五） 第二部分pEGFP-N₃转染人脂肪来源间充质干细胞
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• （六） 第三部分人脂肪来源干细胞皮下移植的实验研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢